構(gòu)建假單胞菌突變株M18GQ攜帶重組質(zhì)粒pME6032Phz的工程菌株及響應(yīng)面法優(yōu)化吩嗪-1-羧酸發(fā)酵條件的研究.pdf

1、假單胞菌M18(Pseudomonas sp. M18)分離自上海郊區(qū)甜瓜根際,能夠分泌具有廣譜抑制真菌活性的次生代謝產(chǎn)物吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid, PCA),是一株具有生物防治功能的新型菌株。本研究構(gòu)建了M18菌株phz基因簇的過(guò)表達(dá)重組質(zhì)粒pME6032Phz,并將其導(dǎo)入M18野生株及其突變株中,結(jié)果表明攜帶重組質(zhì)粒后各菌株的PCA產(chǎn)量都有一定的提高。其中,M18GQ/pME6032Ph

2、z菌株——染色體上gacA/qscR雙突變株M18GQ攜帶重組質(zhì)粒pME6032Phz——具有最高的PCA產(chǎn)量。為發(fā)掘M18GQ/pME6032Phz工程菌株高產(chǎn)PCA的潛能,進(jìn)一步開(kāi)展該菌株的培養(yǎng)基優(yōu)化研究。在搖瓶實(shí)驗(yàn)中,首先運(yùn)用單因子實(shí)驗(yàn)方法對(duì)其發(fā)酵條件進(jìn)行初篩,確定IPTG(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside)誘導(dǎo)的最優(yōu)條件。繼后,通過(guò)部分因子設(shè)計(jì)( fractional factorial

3、 design, FFD )確定影響M18GQ/pME6032Phz菌株發(fā)酵生產(chǎn)PCA的最顯著因素為：黃豆粉、玉米漿和乙醇。隨后通過(guò)最陡爬坡實(shí)驗(yàn)和基于中心組合實(shí)驗(yàn)(center compositedesign, CCD)的響應(yīng)面方法(response surface methodology, RSM),研究了這些因子的相互作用關(guān)系,并確定了最優(yōu)濃度。優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為黃豆粉65.02 g/l,玉米漿15.36 g/l,葡萄糖12