放射形土壤桿菌多糖發(fā)酵及衍生物的活性分析.pdf

1、多糖具有提高免疫能力、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化等生物學(xué)活性,對多糖的研究越來越受到人們的重視.本文選取一株自行篩選的放射形土壤桿菌,研究了其生產(chǎn)胞外多糖(ARPS)的發(fā)酵條件;并對該多糖進(jìn)行了分離純化、結(jié)構(gòu)分析及硫酸酯化修飾,探討了硫酸酯化衍生物抗氧化與抗腫瘤活性.主要取得以下成果:1)確定了放射形土壤桿菌適宜的培養(yǎng)基成分和發(fā)酵條件:蔗糖45 g·L<'-1>;酸水解酪蛋白10 g·L<'-1>;混合磷酸鹽((NH<,4>)<,2>HPO

2、<,4>:K<,2>HPO<,4>=2:1 w/w)濃度為2.4g·L<'-1>;發(fā)酵種子液適宜的種齡和接種量分別為16h和10％(v/v);搖瓶裝液量為500ml搖瓶裝100~125ml培養(yǎng)基,搖床轉(zhuǎn)速為180rpm;添加表面活性劑Tween80或菜油可以改善發(fā)酵液的溶氧水平,有助于提高ARPS產(chǎn)量;發(fā)酵溫度在30~32℃;初始pH為6.5,培養(yǎng)周期72h.在優(yōu)化的培養(yǎng)條件下,胞外多糖產(chǎn)量可達(dá)24.8 g·L<'-1>.2)采用95％

3、乙醇醇析從發(fā)酵液中分離多糖,Sevage法除蛋白,透析得到多糖半純品;再經(jīng)Sephadex G-75分離純化得到精制樣品;Sephadex G-150和紫外光譜檢測表明ARPS為不含雜質(zhì)的均一多糖,且樣品相對分子質(zhì)量為7.2×10<'4>.3)氣相色譜分析確定樣品單糖組分為葡萄糖,紅外光譜、高碘酸氧化、Smith降解,<'13>C-核磁共振等分析結(jié)果確定ARPS的結(jié)構(gòu):主鏈上帶有β-(1→6)-D-葡萄糖殘基支鏈的β-(1→3)-D-葡

4、聚糖.4)對ARPS進(jìn)行了化學(xué)修飾,得到硫酸酯化衍生物,進(jìn)行了紅外光譜分析,并測定了它們的取代度.剛果紅試驗結(jié)構(gòu)表明,ARPS經(jīng)過硫酸酯化修飾后構(gòu)象改變,衍生物不再具有三螺旋構(gòu)象.5)體外實驗結(jié)果表明,硫酸酯化ARPS具有抗氧化及抗腫瘤作用.衍生物對鄰苯三酚自氧化過程中產(chǎn)生的超氧陰離子有清除作用;對過氧化氫誘導(dǎo)的紅細(xì)胞溶血有一定的緩解作用,但高濃度下緩解作用消失;低取代度的衍生物抑制CCl<,4>引發(fā)的小鼠肝脂質(zhì)過氧化效果較好;較高取代