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1、用篩選培養(yǎng)基從土壤篩選出12株葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶的產(chǎn)酶量都較高的菌株(AS1~AS12),其中AS9產(chǎn)酶能力最強(qiáng),所以選取AS9作為下一步研究的實(shí)驗(yàn)菌株。測(cè)定了AS9菌株的18SrDNA序列,經(jīng)過序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)AS9是黑曲霉(Aspergillusniger)。
AS9菌株的最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基配方為:葡萄糖6.0%,蛋白胨0.4%,硝酸鉀0.5%,氯化鉀0.1%,磷酸氫二鉀0.15%,MgSO4.7H2O0.05%,Ca
2、CO30.01%,pH8.0。最佳產(chǎn)酶條件為:發(fā)酵溫度28℃,培養(yǎng)時(shí)間72h,裝液量75mL/250mL,搖床轉(zhuǎn)速200r/min。在此優(yōu)化條件下,該菌產(chǎn)葡萄糖氧化酶酶活力為3.42U/mL,是優(yōu)化前的3.58倍;過氧化氫酶活力為229.3U/mL是優(yōu)化前的1.75倍。
對(duì)AS9菌株所產(chǎn)的葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶酶學(xué)性質(zhì)的研究結(jié)果表明:葡萄糖氧化酶酶促反應(yīng)的最適溫度為40℃,最適pH為6.0,該酶在45℃以下、pH5.0-
3、8.0基本穩(wěn)定;過氧化氫酶酶促反應(yīng)的最適溫度為40℃,最適pH為7.0,該酶在40℃以下、pH3.0-8.0基本穩(wěn)定;Cu2+對(duì)葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶都有強(qiáng)烈的抑制作用,而2n2+、Mg2+則有激活作用。
以殼聚糖作為載體,戊二醛為交聯(lián)劑,將葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶同時(shí)固定化,用所得固定化酶催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸鈣。結(jié)果表明,固定化葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶的回收率分別為86.9%和54.3%;反復(fù)用該固定化酶制備葡萄糖
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