酶法轉(zhuǎn)化合成2-氧-α-D-吡喃葡萄糖基抗壞血酸.pdf

1、維生素C(Vitamin C，VC)是水溶性維生素，化學名稱為抗壞血酸。參與很多體內(nèi)的生理活動，在保持和促進人體健康中起到重要的作用。由于VC本身的化學結(jié)構(gòu)極不穩(wěn)定，在空氣中易被氧化，限制了應用范圍。因此，如何增強VC的穩(wěn)定性是目前國內(nèi)外學者所關心的問題。研究發(fā)現(xiàn)．通過替換VC分子結(jié)構(gòu)中C2位的氫原子可使VC對熱等的穩(wěn)定性大幅度地提高。作為VC衍生物，2-氧-α-D-吡喃葡萄糖基抗壞血酸(AA-2G)由于在2位上有葡萄糖掩蔽，不會發(fā)生V

2、C的氧化反應。它在水溶液中特別穩(wěn)定，本身并無直接還原性，它可被細胞膜上的酶系水解，水解產(chǎn)物VC則被轉(zhuǎn)運到體內(nèi)。本課題就AA-2G的生物轉(zhuǎn)化合成進行了系統(tǒng)的研究。
　　 本論文以本研究室的大腸桿菌基因工程菌高產(chǎn)的環(huán)糊精葡萄糖苷轉(zhuǎn)移酶(CGTase)為研究對象，以β-環(huán)糊精和VC作為底物，轉(zhuǎn)化合成AA-2G。論文的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1.對該酶轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物通過LCMS/MS鑒定為AA-2G，選擇β-環(huán)糊精作為繼續(xù)優(yōu)

3、化的底物。對于出現(xiàn)的中間產(chǎn)物AA-2Gs，通過研究最佳的水解條件是：糖化酶加酶量10U/mL，水解時間6h。
　　 2.通過單因素實驗初步確定了轉(zhuǎn)化的最佳條件。在該條件的基礎上，研究了加酶量對轉(zhuǎn)化的影響，選擇160U作為最佳加酶量。進一步通過響應面實驗對糖基抗壞血酸的轉(zhuǎn)化條件進行了考察，得到最佳轉(zhuǎn)化條件為：轉(zhuǎn)化溫度36.5℃、初始pH5.4、轉(zhuǎn)化時間25h、VC72g/L、β-環(huán)糊精55g/L，優(yōu)化后糖基抗壞血酸產(chǎn)量達到9.76