基于比色酶片與金標(biāo)免疫層析試紙的食品安全快速檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、近年來食品安全重大事件層出不斷，人們對(duì)于國(guó)內(nèi)的食品安全普遍持懷疑態(tài)度，如何度過這場(chǎng)“信任危機(jī)”是我國(guó)食品行業(yè)急待解決的問題。現(xiàn)有食品質(zhì)量監(jiān)督體系普遍建立在實(shí)驗(yàn)室儀器分析技術(shù)的基礎(chǔ)上，食品的抽樣送檢過程，不僅耗時(shí)費(fèi)力，且信息發(fā)布嚴(yán)重滯后，很難對(duì)消費(fèi)者質(zhì)疑的產(chǎn)品進(jìn)行快速反應(yīng)。同時(shí)，由于對(duì)監(jiān)管體制的不信任，越來越多的消費(fèi)者期望能自己對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行快速定性檢測(cè)，尤其是對(duì)每日生活所必需的農(nóng)副產(chǎn)品。因此，迫切需要發(fā)展快速、靈敏、低成本的食品安全現(xiàn)場(chǎng)快測(cè)

2、技術(shù)。本研究針對(duì)食品安全中的農(nóng)藥殘留和漁藥殘留問題，分別研制了比色酶片和金標(biāo)免疫層析試紙。
　　 基于有機(jī)磷與氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶(AChE)的抑制作用，以吲哚酚乙酸酯為酶促水解反應(yīng)的顯色底物，制備了一種拋棄型比色酶片用于農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)。在選擇了合適的酶源與顯色底物后，通過比較不同載體及不同固定方法對(duì)于制備酶片性能的影響，最終確定采用物理吸附法將AChE固定到Hybond N+膜上。經(jīng)過對(duì)酶固定過程中的溫度、時(shí)間、干

3、燥方法及點(diǎn)樣酶量的優(yōu)化，以酶活回收率為指標(biāo)，確定了酶片制備的具體過程為：將5μL AChE稀釋液(800 U/mL)點(diǎn)樣到1 cm2的Hybond N+膜中央，4℃下固定30 min后用PBS(0.1 mol/L，pH8.0)沖洗數(shù)次，再將酶片真空冷凍干燥并保存于4℃冰箱中，該方法制備的酶片酶活回收率可達(dá)27.3％。此外，通過對(duì)檢測(cè)過程中底物濃度、抑制時(shí)間和顯色時(shí)間的優(yōu)化，確定了最終的檢測(cè)過程為：取50μL待測(cè)樣品液滴加至酶片上，30℃

4、下抑制15 min后，用吸水紙吸去多余樣品液，滴加10μL的吲哚乙酸酯溶液(10 mmol/L)，10 min后觀察顯色結(jié)果。該酶片顯色結(jié)果為藍(lán)綠色，通過比較顯色強(qiáng)度的變化，酶片對(duì)農(nóng)藥標(biāo)樣氧樂果、毒死蜱、敵敵畏、甲胺磷、甲奈威與抗蚜威的檢出限分別為1、0.1、2、0.05、1.5與0.8μg/mL。將研制的酶片用于果汁(葡萄汁、蘋果汁和橙汁)與生菜樣品的檢測(cè)結(jié)果證實(shí)，該酶片具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷與氨

5、基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)。
　　 基于膠體金免疫層析技術(shù)，采用競(jìng)爭(zhēng)法，以硝酸纖維素(NC)膜為載體，以兔抗氯霉素多克隆抗體為標(biāo)記蛋白，制備了一種金標(biāo)免疫層析試紙條用于漁藥殘留快速檢測(cè)。該檢測(cè)系統(tǒng)選用20 nm直徑的膠體金用于標(biāo)記抗體，最適pH為8.0，最適蛋白結(jié)合量為每1 mL膠體金結(jié)合7.2μg抗體蛋白。標(biāo)記成功的金標(biāo)抗體經(jīng)低溫高速離心法純化后，以1:5比例稀釋并取20μL固定到用PBS(0.01 mol/L，pH8.0，