甜菊糖苷的提取及萊鮑迪苷A的分離純化研究.pdf

1、甜葉菊(SteviarebaudianaBertoni)是原產(chǎn)于巴拉圭的多年生草本植物,葉片中含有甜味類似蔗糖的物質(zhì)甜菊糖苷(steviolglycosides),甜菊糖苷內(nèi)含10種不同成分的甜昧物質(zhì),其中萊鮑迪苷A(rebaudiosideA,RA)甜味最接近蔗糖,甜度是蔗糖的450倍。甜菊糖苷具有低熱量、甜度高、無毒、無副作用等特點(diǎn),在醫(yī)藥、飲料、調(diào)味劑等方面有廣泛的應(yīng)用。本文首先以甜菊糖苷為研究對象,系統(tǒng)的研究對比了分離甜葉菊中甜

2、菊糖苷的熱水提取法和酶提取法的優(yōu)劣,探討了甜菊糖苷粗提液中微生物的去除方法;其次以萊鮑迪苷A為研究對象,研究了從甜菊糖苷中分離萊鮑迪苷A的幾種方法,并利用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化出重結(jié)晶分離萊鮑迪苷A的最佳條件。主要研究內(nèi)容及結(jié)論如下:
　　 1、采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化熱水提取甜菊糖苷和纖維素酶輔助提取甜菊糖苷的工藝,以蒽酮硫酸法檢測提取液中甜菊糖苷的含量。結(jié)果表明:在提取次數(shù)為2次,提取料液比(W/V)1:10條件下,熱水提取的最佳條件為溶液

3、提取溫度80℃、提取時間2h,此時提取率(所提產(chǎn)物占葉子的含量)為11.2％;纖維素酶輔助提取的最佳條件為纖維素酶添加量0.2%、溶液pH值5、溶液提取時間1.5h、提取溫度50℃,此時提取率為14.0%。綜合各種因素得出,酶法提取優(yōu)于熱水提取。
　　 2、用重量法檢測甜菊糖苷提取液中的甜菊糖苷含量,與標(biāo)準(zhǔn)品及蒽酮硫酸法檢測出的結(jié)果對比,發(fā)現(xiàn)重量法檢測甜菊糖苷所得的數(shù)據(jù)略低于蒽酮硫酸法的檢測結(jié)果,考慮到實(shí)驗(yàn)誤差,此方法可以用來測

4、定提取液中的甜菊糖苷含量。
　　 3、根據(jù)紫外、雙氧水殺菌,苯甲酸鈉、山梨酸鉀抑菌的原理,將甜葉菊葉子進(jìn)行紫外殺菌及甜菊糖苷提取液中添加雙氧水、苯甲酸鈉、山梨酸鉀來去除提取液中的微生物。結(jié)果表明:紫外殺菌對提取液中的微生物含量沒有影響;雙氧水在添加量為0.15%條件下,25℃殺菌1h或50℃殺菌0.5h都可以將提取液中的全部微生物殺死;苯甲酸鈉和山梨酸鉀都可以在添加量為0.1%,溶液pH為4,在25℃抑菌1h條件下抑制提取液中微

5、生物的生長。
　　 4、采用乙醇丙酮混合溶液對甜菊糖苷進(jìn)行重結(jié)晶,運(yùn)用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化法選擇初選結(jié)晶條件;將結(jié)晶產(chǎn)物溶于乙醇水混合溶液中,得到純度較高萊鮑迪苷A產(chǎn)品。結(jié)果表明:最佳的初選條件為樣品中與乙醇的料液比為1:4,丙酮用量為乙醇的15%,在70℃恒溫水浴中溶解,放入40℃水浴中結(jié)晶8h,樣品結(jié)晶率為45.6%,RA含量為74.8%,RA的結(jié)晶率為70.33%;初選條件下添加晶種后,結(jié)晶率及RA純度都沒有明顯變化,初選條件下進(jìn)

6、行攪拌,樣品結(jié)晶率為54.9%,RA純度為72.2%,RA結(jié)晶率為81.5%,此為最佳結(jié)晶條件;結(jié)晶產(chǎn)物溶解于料液比為1:10的含水量為5%的乙醇水溶液中,在90℃下回流攪拌1h,過濾干燥后得到RA含量為93.8%的產(chǎn)物,樣品產(chǎn)率為54.5%,從最初的產(chǎn)品計算,RA的結(jié)晶率為57.7%。
　　 5、利用薄板層析法分離甜菊糖苷中的甜菊苷和萊鮑迪苷A,在展開劑為正丁醇:水=20:3的條件下,可以將ST和RA分離。用正丁醇:水=5:1