復(fù)合酶結(jié)合堿法制備麥胚活性多肽的研究.pdf

1、本文以脫脂后的小麥胚芽為原料,利用蛋白酶降解蛋白,使蛋白質(zhì)變成可溶的肽類而被分離出來,制備麥胚生物活性多肽。本課題主要研究的內(nèi)容是選擇兩種蛋白酶復(fù)合水解脫脂后的麥胚制備麥胚多肽,探討各個(gè)實(shí)驗(yàn)因素對酶解過程的影響,對主要因素進(jìn)行參數(shù)的分析和優(yōu)化,確定最佳酶解工藝,酶解后進(jìn)行堿提;測量得到的混合多肽溶液的分子量分布;根據(jù)分子量分布的測量結(jié)果將混合多肽利用膜進(jìn)行分級(jí)分離,探討最佳超濾工藝,得到不同分子量的多肽。
　　本課題研究的主要內(nèi)容

2、以及結(jié)果如下:
　　(1)探討制備麥胚多肽的最佳實(shí)驗(yàn)條件,主要采用復(fù)合酶水解麥胚,研究了酶解溫度、酶解pH、酶解時(shí)間、底物濃度、復(fù)合酶配比和添加量等因素,然后調(diào)節(jié)酶解液的pH進(jìn)行堿提,進(jìn)一步提高多肽提取率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶復(fù)合水解麥胚蛋白的最佳工藝為:pH為6,底物濃度為5％,溫度為50℃,提取時(shí)間為90min,加酶量為400U/g,木瓜蛋白酶與中性蛋白酶的添加量的配比(活性比)為1:1,麥胚多肽的提取率高達(dá)8

3、9.87％,水解度達(dá)到19.03％。然后將料液的pH調(diào)到8.5左右,45℃進(jìn)行堿提1h,使多肽的提取率由89.87％提高到93.76％。
　　(2)本實(shí)驗(yàn)采用凝膠過濾層析SephadexG-15來測定麥胚多肽混合液中的分子量的分布,所選用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是肌球蛋白(F3)(2500Da),維生素B12(分子量1355Da)、氧化型谷胱甘肽(600Da)、還原型谷胱甘肽(300Da)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,木瓜蛋白酶與中性蛋白酶復(fù)合的酶解產(chǎn)物中多

4、肽分子量主要在2500-300Da之間,占整個(gè)洗脫峰面積的58.91％。大于2500Da多肽分子和大分子蛋白占27.48％;2500-1335Da之間的多肽分子占14.86％;1335-600Da之間的多肽分子占25.54％;600-300Da之間的多肽分子占18.51％;小于300Da的多肽分子和氨基酸總量占13.57％。
　　(3)根據(jù)所測得的分子量分布情況,利用膜過濾將多肽進(jìn)行分級(jí)分離,探討了操作壓力、操作時(shí)間、料液濃度以及

5、溫度等條件對膜通透量的影響,并且確定了超濾的最佳工藝條件。對分級(jí)分離得到的每一部分多肽進(jìn)行噴霧干燥測定每種多肽片段的比例。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,選用截留分子量為3000Da、1500Da、1000Da的改性聚醚砜平板對水解度為19.03％的小麥胚芽蛋白復(fù)合酶酶解物進(jìn)行超濾分級(jí)分離時(shí)最佳超濾條件為最適料液濃度為1.5％-2％、操作溫度為30℃、操作壓力為0.15MPa、最佳超濾時(shí)間為80min。三級(jí)超濾后得到的小麥胚芽多肽的回收率達(dá)到90.12％