復(fù)合酶法制備小麥胚芽多肽的生物活性研究.pdf

1、本課題選擇復(fù)合蛋白酶水解小麥胚芽后的得到的多肽，測(cè)定分子量分布，利用超濾膜和納濾膜對(duì)小麥胚芽多肽進(jìn)行分段和脫鹽，得到不同分子量的麥胚多肽；研究麥胚多肽的生物活性，包括抗氧化活性、抗疲勞作用、降膽固醇活性等，得出具有較好生物活性的麥胚多肽片段。
　?。?）利用凝膠過濾層析SephadexG-15來測(cè)定通過木瓜蛋白酶和中性蛋白酶復(fù)合水解麥胚蛋白得到的小麥胚芽多肽的分子量分布狀況，結(jié)果顯示，小麥胚芽多肽的分子量主要集中在300Da～25

2、00Da之間，占到59％；2500Da以上的的多肽分子大約占28%；1000Da～2500Da之間的多肽片段大概占到15%；600Da～1500Da之間的多肽分子片段大概占26%；300Da～600Da之間的多肽接近19%；300Da以下的多肽分子大約占總量的14%。根據(jù)所測(cè)的結(jié)果，經(jīng)過不同分子質(zhì)量的超濾膜以及納濾膜設(shè)備（2000Da、1000Da、600Da、300Da）對(duì)小麥胚芽多肽進(jìn)行超濾分段和納濾除鹽，最后得到5種不同分子質(zhì)量的

3、小麥胚芽多肽，分別是：MPT-1（大于2000Da的多肽）、MPT-2（1000～2000Da之間的多肽）、MPT-3（600～1000Da之間的多肽）、MPT-4（300～600Da之間的多肽）、MPT-5（小于300Da的多肽）。
　?。?）抗氧化活性研究
　　通過對(duì)不同分子量和不同濃度的小麥胚芽多肽的體外抗氧化活性實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果顯示出不同濃度的小麥胚芽多肽對(duì)DPPH·、O2-以及OH·都有一定的清除作用，且隨多肽濃度的

4、增大，對(duì)DPPH·、O2-以及OH·清除率也隨之增加。對(duì)于不同分子量的小麥胚芽多肽在同一濃度下進(jìn)行DPPH·清除率和O2-清除率的測(cè)定時(shí)，隨著分子量的降低，其活性越來越強(qiáng)，MPT-4分子段的清除率最好，分別可以達(dá)到92.3%和57.61%。對(duì)于相同濃度的麥胚多肽分子量小的的麥胚多肽的對(duì)OH·的清除率高，在相同濃度下，MPT-4的清除率最高，可以達(dá)到75.24%。
　　建立小白鼠的氧化損傷模型，把170只小白鼠隨機(jī)分成17組，即正常

5、對(duì)照組、模型對(duì)照組、不同分子質(zhì)量以及不同劑量的小麥胚芽多肽實(shí)驗(yàn)組。除正常對(duì)照組外，其余各組進(jìn)行腹部注射600mg/(kg·d)D-半乳糖建立氧化損傷模型，5種不同分子質(zhì)量的多肽組灌胃低、中、高劑量的小麥胚芽多肽，實(shí)驗(yàn)周期為30d，最后進(jìn)行眼球取血，處死小鼠并解剖，測(cè)定血清、肝臟中的超氧化物歧化酶(SOD)的活性、谷胱甘肽過氧化物(GSH-Px)酶的活性、丙二醛(MDA)的含量以及總抗氧化能力(T-AOC)，研究不同分子質(zhì)量小麥胚芽多肽的

6、體內(nèi)抗氧化活性。結(jié)果表明：小麥胚芽多肽能夠使小鼠血清和肝臟中SOD、GSH-Px以及T-AOC的指標(biāo)升高，降低小鼠血清和肝臟中脂質(zhì)過氧化物的MDA含量，具有良好的抗氧化活性?？傮w來說，隨著多肽濃度的升高，抗氧化活性也隨之增強(qiáng)，分子質(zhì)量在1000Da以下的小麥胚芽多肽具有較強(qiáng)的抗氧化活性。
　?。?）抗疲勞作用
　　主要研究麥胚多肽的抗疲勞效果，包括動(dòng)物耐力實(shí)驗(yàn)：對(duì)小鼠灌胃不同濃度的小麥胚芽多肽，進(jìn)行游泳實(shí)驗(yàn)以及爬桿實(shí)驗(yàn)。耐缺

7、氧實(shí)驗(yàn)：對(duì)小鼠灌胃不同濃度的小麥胚芽多肽，進(jìn)行常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)以及急性腦缺血型實(shí)驗(yàn)。體內(nèi)抗疲勞作用：主要目的在于研究小麥胚芽多肽對(duì)對(duì)運(yùn)動(dòng)小鼠血液生化的影響，內(nèi)容包括全血乳酸測(cè)定和肝糖原測(cè)定實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果表明：不同分子量的麥胚多肽在200-1000mg/（kg bw·d）劑量范圍具有延長(zhǎng)小鼠爬桿時(shí)間、游泳時(shí)間、抑制小鼠運(yùn)動(dòng)后全血乳酸含量的活性，并可維持運(yùn)動(dòng)后肝糖原含量等作用，并且在這個(gè)范圍內(nèi)，高劑量的作用效果明顯好于低劑量的作用效果

8、。對(duì)于不同分子量的麥胚多肽，MPT-3（600～1000Da）、MPT-4（300～600Da）、MPT-5（小于300Da）的作用效果比MPT-1（大于2000Da）、MPT-2（1000～2000Da）多肽組的效果要好。小麥胚芽多肽能夠顯著延長(zhǎng)小鼠的常壓抗缺氧時(shí)間，在200～1000mg/（kg bw·d）劑量范圍內(nèi)具有顯著作用，分子量在1000Da以下的多肽的作用效果更加明顯。
　　（4）降膽固醇活性
　　利用模擬膽汁

9、膠束法研究小麥胚芽多肽的降膽固醇活性，制備體外模擬膽汁膠束溶液，模擬人體腸道環(huán)境，分析測(cè)定膽固醇在膽汁膠束溶液中的溶解度，驗(yàn)證小麥胚芽多肽的降膽固醇活性。
　　結(jié)果表明：不同濃度的麥胚多肽對(duì)體系中的膽固醇都有一定的抑制作用，低分子肽組MPT-3、MPT-4和MPT-5組的膽固醇含量經(jīng)過模擬膽汁膠束后與MPT-1相比差異性顯著（P＜0.05）。膽固醇的含量與多肽的分子量有一定的關(guān)系，隨著分子量的變小，體系中膽固醇的含量降低。麥胚多肽