腐敗希瓦氏菌噬菌體的性質(zhì)和防腐應(yīng)用研究.pdf

1、我國水產(chǎn)品資源豐富，種類繁多，是世界上較大的水產(chǎn)品養(yǎng)殖和貿(mào)易大國之一。近年來，隨著人們生活水平的日益提高，水產(chǎn)品因其低脂肪、高蛋白的特點越來越受到人們的歡迎。隨之而產(chǎn)生的是，人們對水產(chǎn)品的鮮度要求也越來越高。微生物的生長和代謝是水產(chǎn)品腐敗變質(zhì)的主要原因。水產(chǎn)品中只有部分微生物參與腐敗，這些細(xì)菌就叫做該水產(chǎn)品的特定腐敗菌，抑制水產(chǎn)品特定腐敗菌的生長可以有效防止水產(chǎn)品的腐敗。
　　 噬菌體是一類能夠感染細(xì)菌的病毒，體積微小，結(jié)構(gòu)簡單

2、，主要由蛋白質(zhì)衣殼和內(nèi)部包裹的核酸組成。噬菌體具有嚴(yán)格的寄生性，廣泛分布于自然界，能夠?qū)Ｒ恍缘牧呀饧?xì)菌，安全性好，對機體及環(huán)境無毒副作用。已有先例將噬菌體用于食品的貯存。
　　 本論文首先從污水中分離一株腐敗希瓦氏菌噬菌體并對其生理特性進(jìn)行研究，然后研究分離得到的腐敗希瓦氏菌噬菌體的抑菌活性及理化因素對噬菌體抑菌活性的影響，最后研究腐敗希瓦氏菌噬菌體對4℃冷藏牙鲆的防腐性能。主要的實驗結(jié)果如下：
　　 1以腐敗希瓦氏菌S

3、p225為宿主菌從污水中分離了一株腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001，該噬菌體裂解性好，能夠在4-5 h內(nèi)使腐敗希瓦氏菌菌懸液變澄清，經(jīng)雙層平板法檢測得到清晰透明的噬菌斑。對該噬菌體的生理特性研究可知該噬菌體核酸類型為DNA，其形態(tài)符合長尾噬菌體科的基本特征，為蝌蚪形，具有寬度約為50 nm的正多邊形頭部和長約150 nm的尾部。該噬菌體的最佳感染復(fù)數(shù)為10，一步生長曲線顯示噬菌體感染宿主菌潛伏期為10 min，爆發(fā)期為20 min，裂解量

4、為98。
　　 2對腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001進(jìn)行抑菌實驗，以培養(yǎng)基和魚肉湯為基質(zhì)時，噬菌體Spp001均能抑制腐敗希瓦氏菌Sp225的生長，保持基質(zhì)澄清。以培養(yǎng)基為基質(zhì)時，濃度為102pfu/mL的噬菌體Spp001不能完全抑制腐敗希瓦氏菌的生長，基質(zhì)OD600nm緩慢上升，細(xì)菌緩慢生長；以魚肉湯為基質(zhì)時，濃度為106pfu/mL和107pfu/mL的噬菌體均能抑制腐敗希瓦氏菌的生長，而保持魚肉湯基質(zhì)的澄清。溫度對噬菌體抑

5、菌活性有影響，腐敗希瓦氏菌噬菌體40℃作用60min存活率為79.2％，60℃作用60 min后效價仍達(dá)到8.0×104pfu/mL，溫度大于70℃噬菌體失去裂解活性。腐敗希瓦氏菌噬菌體在pH為7時抑菌活性最高，此時效價為1.6×108 pfu/mL；噬菌體耐堿性較好，耐酸性較差，在pH為3時，噬菌體己失去裂解性。腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001對含氯消毒劑氯胺和次氯酸鈉具有較強的抗失活能力。10 mg/L-20.mg/L的氯胺僅能使噬菌

6、體的活性降低3％，1 g/L-2g/L能使噬菌體的活性降低約12.5％，500 mg/L-600 mg/L次氯酸鈉能夠滅活腐敗希瓦氏菌噬菌體12.5％，5 g/L-6g/L次氯酸鈉能夠滅活腐敗希瓦氏菌噬菌體22.1％。3 KGray電子束輻照使噬菌體效價和抑菌活性稍有降低，存活率為96.5％，5 KGray電子束輻照明顯降低了腐敗希瓦氏菌的效價和抑菌活性，存活率為21.5％，當(dāng)輻照劑量大于7 KGray時，噬菌體Spp001失去抑菌活性

7、。
　　 3腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001對冷藏牙鲆的抑菌防腐實驗效果明顯。感官鑒定明顯看出噬菌體抑菌防腐效果良好，明顯高于未經(jīng)噬菌體處理的對照組。通過對微生物指標(biāo)的測定可知，腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001實驗組和山梨酸鉀溶液實驗組的菌落總數(shù)和腐敗希瓦氏菌菌落總數(shù)均明顯低于對照組，并且高濃度Spp001噬菌體實驗組菌落總數(shù)和腐敗希瓦氏菌菌落總數(shù)均小于山梨酸鉀溶液實驗組。噬菌體Spp001實驗組和山梨酸鉀實驗組的pH先降低后升高的

8、趨勢比對照組緩慢很多，且實驗組pH的變化趨勢由大到小分別為高濃度的噬菌體Spp001實驗組>山梨酸鉀溶液實驗組>低濃度的噬菌體Spp001實驗組。對魚肉揮發(fā)性鹽基氮的測定表明，實驗組明顯低于對照組，且高濃度噬菌體實驗組和山梨酸鉀實驗組在第十四天仍小于30 mg/100g，表明高濃度噬菌體處理的魚肉未發(fā)生腐敗。
　　 本實驗分離得到的一株腐敗希瓦氏菌噬菌體Spp001，裂解能力較強，且對理化性質(zhì)的耐受力較強，將噬菌體Spp001應(yīng)