兩種植物多酚體外抑制希瓦氏菌和假單胞菌及抗生物被膜的研究.pdf

1、海魚因肉質(zhì)鮮嫩味美，富含人體必需氨基酸及豐富的維生素，倍受歡迎。然而由于高水分、高蛋白、高脂肪（尤其是不飽和脂肪酸）的特性而容易腐敗。魚類的腐敗主要是微生物的活動(dòng)引起的，尤其是特定腐敗菌(specialspoilage bacterial，SSO)。有研究表明，溫帶水域捕撈的魚類、貝類的特定腐敗菌多為腐敗希瓦氏菌（S.putrefaciens）或假單胞菌（P.aeruginosa）。植物多酚是廣泛存在于水果、蔬菜和很多食物中自身含有抗氧

2、劑的統(tǒng)稱。主要有黃烷、單寧、酚酸、黃酮等。植物多酚在抑菌方面能具有來源廣、效果好及廣譜性的特點(diǎn)而倍受關(guān)注。此外，近幾年的研究發(fā)現(xiàn)多酚可以干擾被膜的形成。
　　本文以水產(chǎn)品中特定腐敗菌（腐敗希瓦氏菌和假單胞菌）為研究對(duì)象，分析了常見6種植物提取物的抗氧化性和抑菌活性，主要研究了茶多酚(TP)和葡萄籽提取物(GSE)對(duì)特定腐敗菌的抑菌和殺菌活性，初步探討了抑菌機(jī)理。并且研究了亞抑菌濃度的TP和GSE對(duì)兩種腐敗菌的抗生物膜能力，分析了多

3、酚的作用時(shí)期及對(duì)胞外多糖分泌和細(xì)菌新陳代謝的影響。
　　1、采用5種抗氧化方法對(duì)市售的6種植物提取物進(jìn)行抗氧化能力評(píng)價(jià)，總酚含量、DPPH清除力、還原力有明顯的相關(guān)性。總酚含量最高的是TP，可達(dá)613.95 mg GAE/g，其次是GSE，含量為499.69mg GAE/g。還原力IC50分別為33.10μg/mL和74.40μg/mL，DPPH·清除的IC50為5.05μg/mL和6.63μg/mL，優(yōu)于VC和BHT。濃度為1m

4、g/mL，TP和GSE對(duì)金屬鐵離子螯合率和超氧陰離子的清除率都達(dá)50％以上?？寡趸u(píng)價(jià)方法中，。植物提取物對(duì)2種特定腐敗菌均有抑制作用，其中TP和GSE抑菌活性強(qiáng)，其最小抑菌濃度(MIC)分別為:TP(1 mg/mL)，GSE(2 mg/mL)，迷迭香(32 mg/mL)，甘草(32 mg/mL)，魚腥草(16mg/mL)及生姜提取物(32～64 mg/mL)。結(jié)果也證實(shí)了植物多酚抗氧化能力和抑菌活性正相關(guān)。
　　2、TP和GSE

5、對(duì)腐敗希瓦氏菌和假單胞菌具有較好的抑制效果，TP的MIC和MBC為1mg/mL和16mg/mL，GSE的MIC和MBC為2mg/mL和32～64mg/mL。2MIC TP和GSE顯著抑制4株腐敗菌的生長(zhǎng)(p＜0.05)，經(jīng)48h的培養(yǎng)，細(xì)菌總數(shù)分別降低了約4～5 Log CFU/mL。兩種植物多酚在25℃和4℃條件均表現(xiàn)一定的殺菌能力，在25℃條件下，菌落數(shù)分別下降了5 LogCFU/mL(TP)和3 Log CFU/mL(GSE)。其

6、殺菌作用表現(xiàn)時(shí)間依賴性，且25℃比4℃更敏感。TP和GSE的四種兒茶素單體的抑菌效果依次為EGCG＞ECG＞EGC＞EC。在大黃魚體上實(shí)驗(yàn)時(shí)，96h時(shí)，總菌落數(shù)(TVC)，產(chǎn)硫化氫菌和假單胞菌較對(duì)照組下降了3，3，2 Log CFU/m（2MIC TP處理）和2，2，1 CFU/mL（2MIC GSE處理），比肉湯中的抑制效果弱。
　　3、隨著TP和GSE作用時(shí)間的延長(zhǎng)，希瓦氏菌和假單胞菌上清液中的Na+/K+-ATP和AKP酶逐

7、步上升。說明細(xì)胞膜的通透性增大，但是260nm的吸收值沒有顯著性增加說明核膜并沒有破損。掃描電鏡觀察TP處理的細(xì)胞出現(xiàn)了破損、變型等現(xiàn)象。可見，TP能有效抑制腐敗希瓦氏菌和假單胞菌的生長(zhǎng)，通過細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞外膜的損傷，增加細(xì)胞膜通透性，改變細(xì)胞形態(tài)，使細(xì)菌死亡。
　　4、希瓦氏菌和假單胞菌能夠形成被膜，其中2～3天是快速成膜的時(shí)期，5天后形成成熟的生物被膜。TP和GSE在亞抑菌濃度已可以抑制被膜的形成，且濃度與抑制率呈量效關(guān)系。