耐藥性嗜麥芽窄食單胞菌和綠膿桿菌噬菌體初步應(yīng)用研究.pdf

1、目的:嗜麥芽窄食單胞菌是一種常見的條件致病菌，由于其能定殖在呼吸道上皮細(xì)胞和醫(yī)療設(shè)備表面使其很容易感染免疫力低下患者，嗜麥芽窄食單胞菌所導(dǎo)致的感染以呼吸道感染最為常見。銅綠假單胞桿菌也是臨床上最常見的條件致病菌之一，兩類細(xì)菌對多類抗生素具有固有耐藥性，它們的院內(nèi)感染對人類健康特別是免疫力低下患者造成重大威脅。
　　本研究就目前嗜麥芽窄食單胞菌和銅綠假單胞桿菌的嚴(yán)重耐藥性現(xiàn)狀，分別利用臨床分離的多重耐藥嗜麥芽窄食單胞菌SMA2和銅綠

2、假單胞桿菌Pa44，從醫(yī)院污水中分離到可裂解SMA2的噬菌體IME13、IME15以及Pa44的噬菌體Pa27P1，分析它們的生物學(xué)特性，并構(gòu)建SMA2免疫抑制Balb/c小鼠肺部感染治療模型、Pa44腹腔感染小鼠模型及其治療模型。
　　方法:以臨床分離的耐藥性嗜麥芽窄食單胞菌SMA2和銅綠假單胞桿菌Pa44為指示菌，利用噬斑法從醫(yī)院污水中分離噬菌體;利用雙層平板培養(yǎng)法測定噬菌體效價、最佳感染復(fù)數(shù)及一步生長曲線等生物學(xué)特性;蛋白酶

3、K/SDS法提取噬菌體IME13、IME15基因組并用454測序儀測定噬菌體全基因組序列。
　　用滴鼻法給小鼠肺部感染最小致死量的嗜麥芽窄食單胞菌SMA2，感染后分別用嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體IME13、IME15經(jīng)滴鼻方式進(jìn)行治療，記錄小鼠死亡率和噬菌體的治療效果。利用腹腔注射的方法建立小鼠的銅綠假單胞桿菌Pa44全身感染模型。應(yīng)用篩選出的噬菌體Pa27P1分不同時間點(diǎn)和不同治療劑量經(jīng)腹腔注射對腹腔感染耐藥性銅綠假單胞菌Pa44的

4、Balb/c小鼠進(jìn)行治療，觀察噬菌體的治療效果。
　　結(jié)果:成功分離出2株嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體IME13、IME15，其中IME13具有獨(dú)特的噬斑形態(tài)和多達(dá)3100的爆發(fā)量，IME15是第一株T7類嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體;成功分離出銅綠假單胞桿菌噬菌體近90株，并篩選出5株相對廣譜的Pa3P1、Pa4P5、Pa12P1、Pa20P5和Pa28P2，這五株噬菌體的組合在體外能裂解所有18株銅綠假單胞桿菌。
　　動物實(shí)驗表明噬

5、菌體IME13和IME15對于嗜麥芽窄食單胞菌SMA2導(dǎo)致的肺部感染具有較好的治療效果，噬菌體Pa27P1對于銅綠假單胞桿菌Pa44導(dǎo)致的全身感染和肺部感染具有較好的治療效果，在感染后及時進(jìn)行噬菌體治療對于降低小鼠死亡率有一定意義。結(jié)論:隨著嗜麥芽窄食單胞菌和銅綠假單胞桿菌耐藥性和對免疫抑制患者的致病性日趨嚴(yán)重，積極探索不依賴抗生素的治療方法勢在必行。研究結(jié)果表明利用醫(yī)院廢水分離噬菌體并用于治療細(xì)菌感染性疾病的方法是可行的，有望為細(xì)菌感