TLR7基因拷貝數(shù)變異與漢族系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的相關(guān)性研究.pdf

1、背景和目的：
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemiclupuserythematousus，SLE）是一種表現(xiàn)為多種自身抗體生成，免疫復(fù)合物沉積，導(dǎo)致全身多器官臟器損害的自身免疫性疾病。SLE目前發(fā)病機(jī)制不十分明確，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為是由遺傳、感染、性激素、環(huán)境等因素相互作用引起機(jī)體免疫調(diào)節(jié)紊亂所導(dǎo)致的自身免疫性疾病。發(fā)病率和患病率在不同種族及地區(qū)有著很大的差異，不同地區(qū)及人種SLE患者的臨床表型也存在差異，亞洲人群比歐洲人群更常見

2、腎臟受累。這提示了遺傳因素在SLE發(fā)病及臨床表型的復(fù)雜性方面起了作用。SLE所具有的家族聚集現(xiàn)象是遺傳因素參與的重要證據(jù)，約有11％-12％的患者一級(jí)親屬也患有系統(tǒng)性紅斑狼瘡。同時(shí)家系雙生子研究也提示單卵雙生患病比例(24％-65％)高于異卵雙生比例(2％-9％)，雙胞胎的患病風(fēng)險(xiǎn)是正常人的8-29倍。
　　 隨著遺傳學(xué)的進(jìn)步，研究方法的更新，學(xué)者們用全基因組關(guān)聯(lián)分析單核苷酸多態(tài)性(SNP-GAWS)方法對(duì)SLE家系進(jìn)行研究，發(fā)

3、現(xiàn)了一些有價(jià)值的易感基因。通過SNP-GWAS人們只能解釋相對(duì)一小部分疾病風(fēng)險(xiǎn)，不同于SNP，基因拷貝數(shù)變異(copynumbervariations，CNVs)也是遺傳多樣性的一種主要表現(xiàn)，并且是人類基因變異的重要遺傳基礎(chǔ)。隨著人類基因組計(jì)劃的完成，目前發(fā)現(xiàn)了多個(gè)SLE的易感基因和位點(diǎn)，shen等在亞洲人群4334例狼瘡患者和4940例健康對(duì)照的TLR7區(qū)域基因進(jìn)行了多態(tài)性研究，發(fā)現(xiàn)了TLR7SNP(rs3853839)與SLE易感性

4、相關(guān)。還有學(xué)著研究發(fā)現(xiàn)ETS1和WDFY4基因、TNIP1和PRDM1基因等基因多態(tài)性與SLE的易感性同樣具有相關(guān)性。關(guān)于基因拷貝數(shù)變異在SLE中的研究，目前已發(fā)現(xiàn)FCGR3B、C4、CCL3L1等基因的拷貝數(shù)變異與SLE有相關(guān)性。此外基因拷貝數(shù)變異與其他免疫性疾病也已廣泛研究，人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CNVs現(xiàn)象可以通過影響免疫系統(tǒng)的基因來(lái)增加人類自身免疫性疾病的易感性。
　　 TLR7是Toll樣受體家族的一員，主要識(shí)別病毒單鏈RNA，

5、同時(shí)也識(shí)別人工合成的一些抗病毒分子如Imiquimod、R848、Loxoribine等，通過MyD88信號(hào)通路促進(jìn)炎癥產(chǎn)生，介導(dǎo)非特異性天然免疫應(yīng)答。TLR7基因位于X染色體短臂2區(qū)2帶，動(dòng)物模型的研究表明TLR7過度表達(dá)會(huì)誘導(dǎo)鼠狼瘡的發(fā)生，缺少TLR7的MRL/lpr鼠表現(xiàn)為抗核抗體產(chǎn)生減少，腎小球表現(xiàn)出低水平的免疫復(fù)合物沉積。此外，在TLR7基因拷貝數(shù)為4-23倍的轉(zhuǎn)基因小鼠中，TLR7mRNA的表達(dá)大幅度增加，導(dǎo)致了嚴(yán)重的炎癥反

6、應(yīng)。徐薇等人研究發(fā)現(xiàn)TLR7mRNA在SLE患者活動(dòng)期顯著升高，提示TLR7與SLE活動(dòng)相關(guān)，而TLR7的表達(dá)異?？赡芘c狼瘡患者的關(guān)節(jié)炎病理過程有關(guān)。
　　 目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)TLR7基因與SLE或SLE-LN的研究焦點(diǎn)主要集中在SNP。隨著人類基因組基因拷貝數(shù)變異圖譜的完成，基因拷貝數(shù)逐漸引起重視。目前已有一些基因拷貝數(shù)變異與系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)性的研究，呂詠梅等在中國(guó)漢族人群中研究發(fā)現(xiàn)C4基因拷貝數(shù)變異與中國(guó)漢族人群SLE易感性相

7、關(guān)，未發(fā)現(xiàn)總C4基因拷貝數(shù)與某一臨床表型相關(guān)，但C4A可能與關(guān)節(jié)炎的發(fā)生密切相關(guān)。MariamMolokhia等人在非洲人群中研究發(fā)現(xiàn)FCGR3B基因拷貝數(shù)（0或1）與歐洲人的分布具有差異，同時(shí)提示低拷貝數(shù)FCGR3B是SLE的風(fēng)險(xiǎn)因素。另有文獻(xiàn)報(bào)道TLR7基因拷貝數(shù)變異在系統(tǒng)性紅斑狼瘡與健康對(duì)照無(wú)明顯差異，TLR7CNVs與狼瘡患者抗體的產(chǎn)生也無(wú)明顯關(guān)系。Humberto等人報(bào)道TLR7基因拷貝數(shù)升高對(duì)于墨西哥兒童SLE是危險(xiǎn)因素，也

8、證實(shí)了X連鎖基因數(shù)量與SLE的易感性相關(guān)，但與狼瘡腎炎的發(fā)生無(wú)明顯關(guān)系。
　　 目前，在亞洲人群中尚未報(bào)道TLR7基因拷貝數(shù)變異與系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其臨床表型的相關(guān)性。基于以上分析，本課題組擬對(duì)中國(guó)漢族337例SLE患者及338例健康對(duì)照測(cè)定TLR7基因拷貝數(shù)，探討中國(guó)人群TLR7基因拷貝數(shù)變異與SLE遺傳易感性之間的關(guān)系;同時(shí)分析TLR7基因拷貝數(shù)變異與SLE不同臨床表型之間的關(guān)系。為探索SLE遺傳易感性提供有力的支持，從而為全

9、面認(rèn)識(shí)并理解SLE遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制提供基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.2010-2012年間，從鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎病風(fēng)濕科門診及病房收集337例SLE患者的血標(biāo)本。從體檢科及鄭州大學(xué)學(xué)生健康志愿者中收集338例健康對(duì)照者血標(biāo)本。提取SLE患者及健康對(duì)照血標(biāo)本的DNA，放于-80℃冰箱保存。
　　 2.用AccuCopyTM多重基因拷貝數(shù)檢測(cè)技術(shù)方法在337例漢族人SLE患者及338例健康對(duì)照中測(cè)定TLR7基因拷

10、貝數(shù)。
　　 3.采用病例-對(duì)照及病例-病例研究，分析TLR7基因拷貝數(shù)在健康及SLE患者之間的差異;并在SLE患者之間按臨床表型分為腎炎組、非腎炎組，血液系統(tǒng)受累組、非血液系統(tǒng)受累組，抗Sm抗體陽(yáng)性組、抗Sm抗體陰性組，分析TLR7基因拷貝數(shù)與不同臨床表型之間的相關(guān)性。
　　 4.用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，定量資料數(shù)據(jù)采用中位數(shù)和四分位數(shù)來(lái)描述，兩獨(dú)立樣本的均值比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，定性資料用率來(lái)表示，P＜0.

11、05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.中國(guó)漢族人TLR7基因拷貝數(shù)在人群中的分布:337例SLE患者中，女性SLE組TLR7基因拷貝數(shù)范圍1～3，其中1拷貝4例，2拷貝302例，3拷貝1例;男性SLE組TLR7基因拷貝數(shù)范圍1～2，其中1拷貝29例，2拷貝1例;338例健康對(duì)照組中，女性對(duì)照組TLR7基因拷貝數(shù)范圍1～2，其中1拷貝22例，2拷貝237例。男性對(duì)照組1拷貝79例。
　　 2.女性組TLR7

12、基因拷貝數(shù)在SLE組和健康對(duì)照組之間的分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Z=-1.175，P=0.240）;男性組TLR7基因拷貝數(shù)在SLE組和健康對(duì)照組之間的分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=-1.085，P=0.278)。
　　 3.女性組TLR7基因拷貝數(shù)在狼瘡腎炎組和非狼瘡腎炎組之間的分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Z=-0.888，P=0.375）;男性組TLR7基因拷貝數(shù)在狼瘡腎炎組和非狼瘡腎炎組之間的分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Z=-0.460，P=0.646）。<

13、br>　　 4.女性組TLR7基因拷貝數(shù)在狼瘡血液系統(tǒng)受累組和非血液系統(tǒng)受累組之間的分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Z=-1.085，P＝0.278），男性組TLR7基因拷貝數(shù)在狼瘡血液系統(tǒng)受累和非血液系統(tǒng)受累組之間的分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=-0.340，P=0.733)。
　　 5.女性組TLR7基因拷貝數(shù)在抗Sm抗體陽(yáng)性組和陰性組之間的分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=-0.529，P=0.597)。男性組TLR7基因拷貝數(shù)在抗Sm抗體陽(yáng)性組和陰性組

14、之間的分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=-0.158，P=0.874)。
　　 結(jié)論：
　　 1.中國(guó)漢族人TLR7基因拷貝數(shù)在人群中的分布:女性SLE組TLR7基因拷貝數(shù)中位數(shù)(P25～P75)為2.00(0.11)，健康對(duì)照組為2.01(0.13)。男性SLE組TLR7基因拷貝數(shù)中位數(shù)(P25～P75)為0.98(0.08)，健康對(duì)照組為0.98(0.05)。
　　 2.TLR7基因拷貝數(shù)變異與中國(guó)漢族SLE患者的發(fā)病無(wú)