粗糙脈孢菌糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白功能及產(chǎn)酶條件優(yōu)化研究.pdf

1、本論文對(duì)粗糙脈孢菌（Neurosporacrassa）進(jìn)行了兩方面的研究工作。一部分是三個(gè)纖維二糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的研究，另一部分是對(duì)產(chǎn)酶培養(yǎng)基優(yōu)化的研究。
　　微生物將生物質(zhì)降解為各種糖類物質(zhì)，這些糖類物質(zhì)通過(guò)糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白運(yùn)送到細(xì)胞中，并在細(xì)胞中進(jìn)行進(jìn)一步的代謝。在自然界中，糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對(duì)于碳水化合物的代謝起著至關(guān)重要的作用。在非葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究中，纖維二糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究非常少見(jiàn)。粗糙脈胞菌具有纖維素降解，乙醇發(fā)酵，木糖應(yīng)用等杰出特

2、點(diǎn)，是一個(gè)非常有工業(yè)應(yīng)用潛力的絲狀真菌。2010年，有科學(xué)家首次從粗糙脈孢菌中克隆鑒定了纖維二糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因CDT1、CDT2。但是對(duì)其生理生化功能、基因表達(dá)調(diào)控等分子機(jī)理還不很了解。
　　本論文以三個(gè)纖維二糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白為研究對(duì)象，分別為CDT1、CDT2和CDT3。實(shí)驗(yàn)中構(gòu)建并獲得了三個(gè)基因的單敲除體菌株，雙敲除體菌株及三敲除體菌株。并且在不同碳源培養(yǎng)基中生長(zhǎng)這些菌株，通過(guò)纖維素內(nèi)切酶酶活，木聚糖酶酶活等指標(biāo)反映各個(gè)菌株之間的生長(zhǎng)

3、差異。結(jié)果表明，在以纖維二糖為碳源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的三敲除體菌株T123生長(zhǎng)較雙突變菌株D12差，說(shuō)明CDT3基因與纖維二糖轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)。并通過(guò)綠色熒光蛋白GFP對(duì)糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白進(jìn)行了定位。定位結(jié)果顯示，糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白均在各種膜上進(jìn)行表達(dá)。
　　本論文第二部分是以粗糙脈孢茵基因組測(cè)序菌株FGSC2489為對(duì)象，采用響應(yīng)面分析法對(duì)粗糙脈孢菌搖瓶發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。在初始培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，采用該優(yōu)化培養(yǎng)基，最大纖維素酶活可達(dá):1.27FP