依托泊苷吸入微球劑的研究.pdf

1、肺癌己成為世界范圍內(nèi)發(fā)病率及病死率最高的惡性腫瘤,是癌癥死亡的主要原因,其病死率無論在男性還是女性患者均占惡性腫瘤病死率的首位,嚴(yán)重威脅著人類健康和生命。肺癌的發(fā)病是個(gè)復(fù)雜的多因過程,遺傳因素和環(huán)境因素都起著相當(dāng)重要的作用。近年來,隨著分子生物學(xué)和藥理學(xué)的不斷發(fā)展,肺癌的綜合治療及個(gè)體化治療已取得明顯進(jìn)步。然而由于診斷水平所制,大多數(shù)肺癌患者確診時(shí)已屬晚期,因而化療在肺癌治療中占有非常重要的地位。全身化療會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的系統(tǒng)毒性,而肺部給藥

2、能避免肝臟首過效應(yīng),增加藥物在肺部的滯留時(shí)間,增加細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度,降低所需劑量,降低治療過程中對(duì)正常組織的損傷,目前己成為一種越來越受關(guān)注的給藥途徑。
　　依托泊苷(etoposide)為鬼臼毒素的糖代謝產(chǎn)物,是國(guó)際上公認(rèn)的新型抗腫瘤藥物,也是迄今為止最成功的鬼臼毒素類抗腫瘤藥物,主要對(duì)小細(xì)胞肺癌,有效率達(dá)40%曾至85%,完全緩解率為14%～34%;主要毒性反應(yīng)為骨髓抑制、中性粒細(xì)胞的急劇減少,且水溶性差、溶解速度慢。改變劑型

3、、提高已有抗癌藥的療效、降低其毒副作用,已成當(dāng)務(wù)之急。
　　本課題以聚乳酸-羥基乙酸(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)為載體材料,采用乳化—溶劑揮發(fā)法制備依托泊苷肺部給藥微球制劑。研究?jī)?nèi)容主要包括:依托泊苷PLGA微球的制備與優(yōu)化,理化性質(zhì)與粉體學(xué)性質(zhì)考察,體外釋藥性及初步穩(wěn)定性研究,大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)與肺部分布動(dòng)力學(xué)研究。
　　1、依托泊苷PLGA微球的制備與優(yōu)化
　　本文采用改

4、良的乳化.溶劑揮發(fā)法制備依托泊苷PLGA緩釋微球。首先,采用離心法將載藥微球與游離藥物分離,建立了UV法測(cè)定微球中藥物含量、包封率及載藥量,并對(duì)方法學(xué)進(jìn)行研究。結(jié)果表明,該法操作簡(jiǎn)單,結(jié)果可靠,重現(xiàn)性好、回收率高;其次,對(duì)載藥微球的處方組成和制備工藝進(jìn)行研究,以藥物在微球中的包封率為評(píng)價(jià)指標(biāo),在單因素考察基礎(chǔ)上,采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)微球處方及工藝進(jìn)行優(yōu)化,確定最佳處方和制備工藝;結(jié)果表明,制備微球的最優(yōu)處方為:藥脂比為1:10,PLGA濃

5、度為80 mg/ml,稀釋液中依托泊苷的濃度為0.1 mg/ml,剪切速度為4000rpm。最后,采用冷凍干燥工藝制備干燥微球,并對(duì)干燥工藝進(jìn)行篩選和優(yōu)化,優(yōu)化處方及工藝分別為:濃度為2%的甘露醇溶液作為支架劑,直接放入-80℃冰箱中預(yù)凍12h后放入冷凍干燥機(jī)內(nèi)冷凍干燥24h得到固體微球粉末。
　　2、理化性質(zhì)與粉體學(xué)性質(zhì)考察
　　本文對(duì)干燥微球的理化性質(zhì)及粉體學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了考察,結(jié)果表明,干燥微球粉末呈白色疏松狀,光學(xué)顯微鏡

6、下觀察微球外形圓整、無粘連;DSC結(jié)果表明依托泊苷微球確已形成;平均粒徑為(11.8±1.25)μm,包封率和載藥量分別為(84.2±2.9)%和(7.7±0.3)%,復(fù)溶后pH值近中性。粉體學(xué)性質(zhì)考察結(jié)果表明,平均氣動(dòng)學(xué)徑(2.83±0.30)μm,堆密度低至(33.4±0.002)mg/cm3,流動(dòng)性較好,休止角為(37.2±3.97)°,水分含量為(1.58±0.17)%,排空率達(dá)(96.37±1.92)%,有效部位沉積量達(dá)(38

7、.03±2.30)%。通過對(duì)微球粉末的粉體學(xué)性質(zhì)考察,我們可以初步斷定粉末有效部位沉積量較高,能夠滿足依托泊苷緩釋微球肺部給藥的要求,達(dá)到了預(yù)定的設(shè)計(jì)要求。
　　3、體外釋藥性及初步穩(wěn)定性研究
　　采用動(dòng)態(tài)膜透析法對(duì)干燥依托泊苷PLGA微球體外釋藥性進(jìn)行考察,并對(duì)微球的穩(wěn)定性進(jìn)行了初步考察,考察其在高溫、高濕、光照等條件下隨時(shí)間變化的規(guī)律。結(jié)果表明,依托泊苷注射液在釋放介質(zhì)中釋放迅速,6h累積釋放百分率達(dá)到98.13%;依托

8、泊苷緩釋微球釋放緩慢,第1天累積釋放28.47%,突釋較少,第10天累積釋放57.56%,20天累積釋放達(dá)到80.23%,緩釋效果較好。依托泊苷微球的體外釋藥曲線經(jīng)擬合符合均符合Ritger-Peppas模型,回歸系數(shù)為0.9929。該微球制劑在高溫、高濕度實(shí)驗(yàn)條件下會(huì)發(fā)生聚集粘連,說明微球在高溫、高濕度條件下不穩(wěn)定,應(yīng)在低溫干燥的條件下保存。
　　4、大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)與肺部分布動(dòng)力學(xué)研究
　　本文建立了大鼠體內(nèi)依托泊苷濃

9、度的HPLC測(cè)定方法,并進(jìn)行方法學(xué)考察;以依托泊苷靜脈注射液為對(duì)照,研究依托泊苷PLGA微球肺部給藥后滲漏進(jìn)入體內(nèi)大循環(huán)中的藥物量,考察大鼠肺部給藥后藥物在肺部的蓄積情況。結(jié)果表明,HPLC法測(cè)定大鼠血漿及肺部組織中依托泊苷的濃度,在所選色譜條件下內(nèi)源性物質(zhì)不干擾藥物測(cè)定,方法靈敏度高、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)、萃取率較高,而且生物樣品在貯存過程中較穩(wěn)定,完全滿足生物樣品分析方法的要求;微球組與溶液組相比,半衰期和平均滯留時(shí)間明顯延長(zhǎng),其中平

10、均滯留時(shí)間由18.82h延長(zhǎng)到88.24h,延長(zhǎng)了4.69倍;達(dá)峰時(shí)間明顯推遲,峰濃度由2479.854μg/L變?yōu)?055.613μg/L。靜脈注射給藥15min后,依托泊苷迅速在體內(nèi)分布,到達(dá)各個(gè)臟器;但隨著體內(nèi)的代謝過程不斷進(jìn)行,肺部的藥物量急劇下降,2天后降至3.3μg/g。而氣管滴注微球組在給藥2天內(nèi),藥物在肺部的濃度一直維持在500μg/g范圍內(nèi),有效的提高了依托泊苷在肺部的藥物量。
　　結(jié)論
　　本文成功研制了