基質(zhì)中木聚糖酶活力測(cè)定方法的研究.pdf

1、木聚糖是植物半纖維素的重要成分，是自然界中僅次于纖維素含量第二豐富的可再生資源。木聚糖酶是一類降解木聚糖分子中β-1，4木糖苷鍵的酶系，可將木聚糖水解為低聚木糖、木寡糖、木二糖、以及少量阿拉伯糖和木糖。因此木聚糖酶被廣泛應(yīng)用于生物能源、食品、飼料、制藥、制漿、造紙、紡織等行業(yè)中，已成為國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者的研究熱點(diǎn)。衡量酶生物活性的重要標(biāo)準(zhǔn)是酶活力，目前常用的活力測(cè)定方法是DNS法，該法雖然操作簡(jiǎn)單、精密度高，但靈敏度低，無(wú)法檢測(cè)酶反應(yīng)初速度

2、，無(wú)法檢測(cè)微量木聚糖酶活力。本文建立了3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)法已將其應(yīng)用于木聚糖酶活力的測(cè)定，但將其應(yīng)用于基質(zhì)中木聚糖酶活力的測(cè)定是首次，因此本文首先對(duì)MBTH法測(cè)木聚糖酶活力進(jìn)行了優(yōu)化并與DNS法進(jìn)行了比較。并將其應(yīng)用于飼料中木聚糖酶活力的測(cè)定，聯(lián)合高通量分析手段，可一次性準(zhǔn)確快速的處理大量樣品，因此該法將會(huì)在各個(gè)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。本論文主要包括以下研究?jī)?nèi)容：
　　1.建立了MBTH法測(cè)酶解產(chǎn)物還原端基的新方法

3、
　　首先對(duì)還原糖測(cè)定條件進(jìn)行了參數(shù)優(yōu)化，其次建立還原糖標(biāo)準(zhǔn)曲線以及與DNS法進(jìn)行比較，最后研究了高濃度木糖含量的測(cè)定方法，并進(jìn)行了方法驗(yàn)證，結(jié)果表明：MBTH法靈敏度高于DNS法10倍以上，且精密度、準(zhǔn)確度都較高；在還原糖濃度較高的情況下，可以進(jìn)行適當(dāng)稀釋后，對(duì)照稀釋后的還原糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算還原糖的量。
　　2.對(duì)MBTH法與DNS法測(cè)木聚糖酶活力進(jìn)行了比較
　　對(duì)MBTH法測(cè)木聚糖酶活力進(jìn)行了優(yōu)化并與DNS法進(jìn)行比較

4、。首先對(duì)底物、酶解溫度進(jìn)行了研究，其次與DNS法在酶解動(dòng)力學(xué)及酶濃度對(duì)反應(yīng)速率的影響進(jìn)行了比較，最后在檢測(cè)限、靈敏度等方面進(jìn)行了方法驗(yàn)證。結(jié)果表明：木聚糖酶與樺木木聚糖親和力較大，最適底物濃度為4 mg/mL，酶解溫度為30℃，當(dāng)酶含量較少時(shí)可選37℃；MBTH法(DL=0.0090μg/mL)在靈敏度和準(zhǔn)確度方面都遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于DNS法(DL=0.107μg/mL)。因此，MBTH法特別適合于木聚糖酶活力的定量測(cè)定。
　　3.MBTH

5、法在飼料基質(zhì)中酶活力測(cè)定的應(yīng)用研究
　　對(duì)MBTH法在飼料木聚糖酶活力測(cè)定進(jìn)行了研究。首先對(duì)飼料中酶的提取方法進(jìn)行了研究，其次對(duì)酶解溫度進(jìn)行優(yōu)化并建立了飼料中的酶濃度曲線，最后MBTH法測(cè)幾種飼料樣品酶活力并進(jìn)行方法驗(yàn)證。結(jié)果表明：飼料酶的最佳提取方式為緩沖液低溫條件下(4℃)電磁攪拌溶解，離心取上清液；飼料中酶活力的最適酶解溫度為37℃；MBTH法可準(zhǔn)確測(cè)定飼料中微量木聚糖酶活力，且具備良好的準(zhǔn)確度靈敏度和精密度。
　　4

6、.高通量分析在飼料酶活力測(cè)定中的應(yīng)用研究
　　運(yùn)用MBTH法聯(lián)合高通量分析手段測(cè)定飼料中木聚糖酶活力。首先對(duì)MBTH法在微孔板體系中的運(yùn)用進(jìn)行了方法優(yōu)化，確立了各項(xiàng)酶解參數(shù)；其次MBTH法與微孔板測(cè)定手段相結(jié)合測(cè)定飼料中的酶活力；最后進(jìn)行方法驗(yàn)證。結(jié)果表明：高通量分析法中MBTH法的酶解參數(shù)與試管法稍有差別，酶濃度曲線的斜率(6.14)和試管法(6.11)基本一致；高通量分析法在測(cè)定飼料酶活力時(shí)有較低的檢測(cè)限(0.190μg/mL