羅氏乳桿菌JC-1無(wú)細(xì)胞上清培養(yǎng)液降膽固醇能力的研究.pdf

1、高熱量食物的攝入和不合理的膳食結(jié)構(gòu)致使動(dòng)脈硬化、高血壓、靜脈血栓等心腦血管疾病的發(fā)病率逐年上升，嚴(yán)重影響著人類(lèi)的健康。而血清膽固醇含量過(guò)高則是引起這一系列疾病的重要原因之一。但是其作用機(jī)理還處于假說(shuō)階段，尚未定論。本論文從體外模型角度繼續(xù)探索乳酸菌移除膽固醇的作用機(jī)理。
　　 羅氏乳桿菌普遍存在于人類(lèi)和大部分動(dòng)物的腸道中，是目前已報(bào)道的具有降膽固醇能力的乳酸菌之一，具有耐酸、耐膽鹽和腸道定殖特性，具有研究?jī)r(jià)值。本文研究發(fā)現(xiàn)羅氏乳

2、桿菌JC-I在無(wú)細(xì)胞參與的情況下仍表現(xiàn)出膽固醇移除能力，其無(wú)細(xì)胞上清培養(yǎng)液（CFS）的膽固醇移除率可達(dá)到68.57％，且移除率隨CFS濃度的降低而降低。沉淀圈現(xiàn)象表明JC-I的CFS中含有膽鹽水解酶（BSH）。CFS通過(guò)加熱處理和調(diào)pH使BSH失活或由BSH作用的共沉淀現(xiàn)象不能發(fā)生的情況下，觀察CFS是否還表現(xiàn)出膽固醇移除能力，其中BSH活力通過(guò)HPLC測(cè)得。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)熱處理的CFS膽固醇移除率和BSH活性大幅度降低；CFS的p

3、H值為7.0時(shí)，由BSH引起的共沉淀作用不能發(fā)生，但是CFS仍具有膽固醇移除能力。因此推斷，CFS中含有除BSH以外的可移除膽固醇的有效成分。
　　 CFS分別經(jīng)過(guò)乙醇提取、乙酸乙酯萃取、70％硫酸銨處理后，經(jīng)過(guò)鹽析獲得的蛋白沉淀有較高的移除膽固醇能力。又經(jīng)TCA處理除去蛋白和SDS使蛋白變性以后，CFS基本喪失移除能力。CFS經(jīng)多種蛋白酶消化處理后，CFS也失去膽固醇移除能力，進(jìn)一步說(shuō)明此有效成分為蛋白質(zhì)類(lèi)。
　　 本

4、文對(duì)此有效蛋白進(jìn)行了分離純化，在純化過(guò)程中，CFS通過(guò)超濾得到濃縮液，硫酸銨分級(jí)沉淀的飽和度范圍為50％-70％，獲得的蛋白沉淀無(wú)BSH活性，但移除膽固醇作用的活性純化倍數(shù)可達(dá)5.6。樣品通過(guò)DEAE Sepharose F.F陰離子交換層析進(jìn)一步分離純化。采用pH為7.0、含0-0.5mol/L NaCl的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，分離效果較好，得到了電泳純的目的蛋白，比酶活為61.6U/mg，純化倍數(shù)為11.7。經(jīng)SDS-PAGE