β-乳球蛋白的分離提純及其酶源降膽固醇活性肽的研究.pdf

1、本研究選用脫鹽乳清粉為原料分離和提純出β-乳球蛋白，以β-乳球蛋白水解度為參照指標對β-乳球蛋白在胰蛋白酶作用下的酶解條件進行優(yōu)化，以鼠肝臟中HMG-CoA還原酶活性變化的體外檢測作為主要方法，對產(chǎn)生β-乳球蛋白源降膽固醇生物活性肽的酶解方式及酶解條件進行篩選，并對有較高HMG-CoA還原酶抑制活性的β-乳球蛋白源生物活性肽進行了分離及分子量范圍的定性。選用CaCo-2細胞培養(yǎng)法對分離所得的β-乳球蛋白源活性肽抑制膽固醇吸收的生物學功能

2、進行評價。
　　 1．結(jié)合硫酸銨分段鹽析和凝膠層析兩種方法，從牛乳乳清蛋白中分離、提純出β-乳球蛋白。通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測結(jié)果顯示：①在20％～30％、70％～80％鹽析段只有兩條帶，分別是β-乳球蛋白和α-乳清白蛋白帶；②再用SephadexG-50凝膠過濾層析，電泳結(jié)果顯示只有一條帶，與標準β-乳球蛋白帶一致。
　　 2．為制備大量的β-乳球蛋白，用胃蛋白酶水解乳清蛋白1.5h，再結(jié)合硫酸銨沉淀法，經(jīng)透

3、析或超濾后，SDS-PAGE檢測獲得較純的β-乳球蛋白。
　　 3．為了獲得產(chǎn)生具有較高HMG-CoA還原酶抑制活性β-乳球蛋白源生物活性肽的酶解方式及酶解條件，首先從5種蛋白酶中篩選出水解度和HMG-CoA還原酶抑制率都較高的胰蛋白酶為最佳水解酶，以單因素試驗、中心組合實驗等實驗設計方法優(yōu)化了β-乳球蛋白的水解條件，然后測定了不同水解階段的水解產(chǎn)物體對HMG-CoA還原酶活性的影響。結(jié)果表明：胰蛋白酶水解β-乳球蛋白9h水解產(chǎn)

4、物具有相對較高的HMG-CoA還原酶抑制活性，約為66.67％。
　　 4．選擇SepHadexG-25為層析材料對β-乳球蛋白源目標活性肽進行分離。用PH8.0、30 mmol/L磷酸鹽緩沖液洗脫，分離出5個相對較窄的組分峰，其中第3組分峰對HMG-CoA還原酶的抑制率達43.75％。對分離所得活性肽分子量范圍的定性采用了Tricine-SDS-PAGE電泳法，電泳結(jié)果表明：具有較高HMG-CoA還原酶抑制活性的第3、4組分中