基于發(fā)根體系的甘薯莖線蟲病研究及甘薯遺傳轉(zhuǎn)化體系建立.pdf

1、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文基于發(fā)根體系的甘薯莖線蟲病研究及甘薯遺傳轉(zhuǎn)化體系建立姓名：阮龍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：吳躍進(jìn)20070501接種的甘薯莖線蟲繁殖數(shù)量明顯增加，僅3周線蟲繁殖數(shù)分別是未添加氨基酸的魯78066發(fā)根對照的228和177倍。4、選用生產(chǎn)上防治甘薯莖線蟲病效果較好的殺線劑：40％qj基異柳磷乳油、50％辛硫磷和O2％紅竽寶以及植物源農(nóng)藥O3％印楝素乳油，用發(fā)根體系來評價它們的殺線活性。結(jié)果表明：40

2、％甲基異柳磷乳油、50％辛硫磷和02％紅竽寶對甘薯莖線蟲都具有很強(qiáng)的殺線蟲活性，測定結(jié)果和田間測定結(jié)果相一致；對環(huán)境友好的植物源農(nóng)藥O3％印楝素乳油對甘薯莖線蟲同樣具有很強(qiáng)的殺線蟲活性；說明用發(fā)根體系評價殺線劑對甘薯莖線蟲的殺線活性是可行的。5、為了探索通過轉(zhuǎn)基因途徑獲得抗莖線蟲病的甘薯品種的可行性，建立了甘薯品種栗子香的胚性懸浮細(xì)胞培養(yǎng)系，用根癌農(nóng)桿菌菌株C58C1對根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甘薯遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。該菌株所攜帶的pCB2

3、002H質(zhì)粒上含有除草劑抗性基因Bar基因。結(jié)果表明，有效的轉(zhuǎn)化方法是：用甘薯栗子香胚性細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)獲得大量胚性懸浮細(xì)胞，將胚性懸浮細(xì)胞團(tuán)(直徑小于10mm)轉(zhuǎn)移到MS2，4一D20medL固體培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)一周后作為受體，侵染菌液濃度OD值為08，在固體MS2，4一D20mg／L培養(yǎng)基上共培養(yǎng)3天，在附加100mg／L羧芐青霉素和10mg／L除草劑的MS2，4一D20mg／L固體選擇培養(yǎng)基上篩選抗性愈傷組織，選擇46周后將除草劑抗