細(xì)胞核定位的srGAP分子在神經(jīng)元分化中的功能研究.pdf

1、SrGAPs(Slit-Robo GTPase-activating proteins)是Slit-Robo下游信號通路中的一組重要的RhoGAP分子。在哺乳動物中,srGAP家族主要由srGAP1, srGAP2, srGAP3和ARHGAP4四個成員組成。近年來眾多的研究顯示srGAP1, srGAP2和srGAP3分子在軸突導(dǎo)向、神經(jīng)元遷移、突起生長和樹突形態(tài)發(fā)生等神經(jīng)元發(fā)育的過程中起到關(guān)鍵的作用。在SVZ/VZ等神經(jīng)發(fā)生的區(qū)域,

2、srGAP家族各成員的mRNA均呈現(xiàn)高表達(dá),提示srGAPs可能作為重要的調(diào)節(jié)蛋白參與調(diào)控神經(jīng)元早期的發(fā)育—神經(jīng)元分化。我們實驗室以往的研究還發(fā)現(xiàn),在神經(jīng)元發(fā)育過程中,srGAP家族各成員存在細(xì)胞漿—細(xì)胞核轉(zhuǎn)位的現(xiàn)象。然而,srGAPs在細(xì)胞核中所扮演的角色仍未被充分揭示。本課題主要探討細(xì)胞核定位的srGAPs在神經(jīng)元分化過程中潛在的功能。我們通過western blotting等手段證實了srGAP家族各成員主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),且

3、在P1至P14階段的大鼠大腦皮層中處于高水平表達(dá)。在體外培養(yǎng)的大腦皮層神經(jīng)元和Neuro2A細(xì)胞中,srGAP3分子與染色質(zhì)重塑復(fù)合物的核心成員Brg1分子共定位于細(xì)胞核。免疫共沉淀的結(jié)果顯示,Neuro2A細(xì)胞中內(nèi)源表達(dá)的srGAP3與Brg1相結(jié)合。SrGAP3在VPA誘導(dǎo)Neuro2A細(xì)胞神經(jīng)元分化的過程中起到陰性調(diào)控的作用,進(jìn)一步深入研究則顯示srGAP3的抑制作用與Rac1的活性密切相關(guān)。此外,我們還發(fā)現(xiàn)過表達(dá)srGAP3會導(dǎo)