黃曲霉毒素降解酶在釀酒酵母細(xì)胞表面上的展示及酶活性質(zhì)的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、黃曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)為黃曲霉和寄生曲霉的次級代謝產(chǎn)物,是一類能夠致癌,致畸,致突變的真菌毒素,被世界衛(wèi)生組織列為一級致癌物,傳統(tǒng)的物理、化學(xué)的去毒方法會造成營養(yǎng)成分大量損失,因此,近些年來,高效穩(wěn)定的生物學(xué)方法備受科研者的關(guān)注。
　　本研究從假蜜環(huán)菌(Armillariella tabescens)的總RNA出發(fā),克隆編碼得到黃曲霉毒素降解酶(Aflatoxin-detoxifizyme,ADTZ)基因,并把該

2、基因連接到表面展示質(zhì)粒載體pYD1上,成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pYD1-ADTZ,并將其轉(zhuǎn)化到釀酒酵母菌EBY100中,通過PCR及雙酶切篩選出陽性轉(zhuǎn)化子,證明了ADTZ基因已經(jīng)整合到釀酒酵母基因組中,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后,用高相液相色譜法定性檢測,結(jié)果表明:當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)間為96h,反應(yīng)溫度為28℃,反應(yīng)時(shí)間為30min時(shí),表面展示的黃曲霉毒素降解酶對黃曲霉毒素的去毒率為12.26％,再通過ELISA法定量檢測黃曲霉毒素降解酶對黃曲霉毒素B1的降解情況,

3、經(jīng)過測定,相同條件下,表面展示的黃曲霉毒素降解酶對黃曲霉毒素的去毒率達(dá)到13.1％,酶活力達(dá)到0.93U/L。
　　通過對表面展示的黃曲霉毒素降解酶的酶活性質(zhì)的初步研究,分別誘導(dǎo)12h,24h,48h,96h,發(fā)現(xiàn)當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)間為48h時(shí),黃曲霉毒素降解酶對AFB1的去毒率達(dá)到最大值,此時(shí)去毒率為24.2％,表面展示ADTZ與黃曲霉毒素B1的最佳反應(yīng)時(shí)間為3h時(shí),酶活性達(dá)最大,最大去毒率為27.3％?？偨Y(jié)不同反應(yīng)時(shí)間,不同誘導(dǎo)時(shí)間對去

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