擬南芥LTP1的分子鑒定及其在乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用.pdf

1、MolecularidentificationandfunctionalSlgnanng●1●ThesissubmittedtolneSlSSUDmltteQtO咖缸D徹砒“厲亂紀(jì)廠訓(xùn)7z劫P疵砂InFul伽mentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceYueSun(CoUegeofLifeScience)Supervisor：profY_aIljunYiprofChunhaiDong

2、Qin酣aoCllinaJune2013青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要擬南芥z冊(cè)的分子鑒定及其在乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用摘要乙烯作為激素會(huì)直接參與植物的生長(zhǎng)發(fā)育、果實(shí)成熟及植物的抗逆境生理反應(yīng)等，人們?cè)谘芯恳蚁┦荏w的同時(shí)，對(duì)乙烯信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的重要下游基因及其相應(yīng)的調(diào)控因子也做了深入細(xì)致的研究，但是對(duì)此信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的重要因子及其調(diào)控特別是乙烯受體的調(diào)控及新的調(diào)控因子和作用機(jī)理還遠(yuǎn)遠(yuǎn)沒有搞清楚。擬南芥的LTPII4蛋白(1ipid仃anSfe

3、rprotein)是么fJg秸巧DJ基因編碼的脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，是根據(jù)酵母雙雜交篩選I盯E1的互作蛋白得到的，我們叫做LTPl蛋白，屬于LTPII亞家族?！叭胤磻?yīng)”初步分析發(fā)現(xiàn)助7突變體和過表達(dá)株系均對(duì)乙烯不敏感，因此我們推測(cè)LTPl蛋白參與植物乙烯反應(yīng)。本研究主要是對(duì)三開_7進(jìn)行分子鑒定并分析其在乙烯反應(yīng)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用。主要研究結(jié)果如下：1突變體坳J及LTPlov過量表達(dá)轉(zhuǎn)基因植物的表型分析表明上即』基因可能參與對(duì)植物乙烯反應(yīng)的調(diào)控

4、。2克隆了擬南芥L刀』的啟動(dòng)子，應(yīng)用酶切連接的方法構(gòu)建了三“fjjGUS表達(dá)載體，GUS報(bào)告基因組織化學(xué)定位檢測(cè)發(fā)現(xiàn)三開『基因在種子萌發(fā)初期不表達(dá)，萌發(fā)4d后開始在根中表達(dá)，7d后在根、莖、葉中均有表達(dá)。3突變體幼J及LTPlov轉(zhuǎn)基因植物中乙烯信號(hào)傳導(dǎo)途徑相關(guān)基因表達(dá)分析表明LTPl對(duì)乙烯信號(hào)傳導(dǎo)通路有調(diào)控作黑：ETRi、ERSi、CTRl、EIN2、EIN3、ERFs等基因在坳_f突變體中表達(dá)量要高于野生型中表達(dá)量，而R您J基因的表

5、達(dá)沒有變化；ACC處理后E豫、劇峪f等基因表達(dá)量在切』突變體中要明顯高于野生型中的表達(dá)量，C豫J、劇加、劇Ⅳ2、ER乃表達(dá)量明顯在突變體中要低于野生型中的表達(dá)量。4運(yùn)用Gatewav分子克隆技術(shù)構(gòu)建了35S：：LTPlGFP過表達(dá)載體，并獲得了轉(zhuǎn)基因株系，LTPlGFP融合表達(dá)載體的亞細(xì)胞定位表明LTPl存在于細(xì)胞周圍，可能是一個(gè)分泌蛋白。5將坳『突變體和乙烯信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的突變體作遺傳雜交，包括，紀(jì)，3，e護(hù)『，P驢J2，P護(hù)2J，8