梨果棒曲霉毒素產(chǎn)生菌的分離鑒定及其生長規(guī)律的研究.pdf

1、梨(Pyrus spp)是我國三大水果之一，品種資源豐富。棒曲霉素(Patulin，Pat)是一種對動物具有致畸、致癌和致突變性的真菌次生代謝產(chǎn)物毒素。棒曲霉素污染造成的商品梨果及以梨濃縮汁為代表的梨加工產(chǎn)品質量安全問題，嚴重影響了梨產(chǎn)品的品質和國際市場競爭力，但污染梨果的棒曲霉素產(chǎn)生菌并不明確，同時缺乏實用的控制技術，研究毒素的主要產(chǎn)生菌及產(chǎn)毒規(guī)律可為提高梨加工品安全性提供基礎理論和技術方法。本文以不同品種腐敗梨果為原料，分離出棒曲霉

2、素主要產(chǎn)生菌并對其進行了形態(tài)及內轉錄間隔區(qū)(Internal transcribed spacer，ITS)區(qū)鑒定；研究了培養(yǎng)基種類、pH值、培養(yǎng)溫度對主要產(chǎn)毒菌株的生長、產(chǎn)毒特性的影響及熱水和二氧化氯對菌株生長的抑制作用。主要結果和結論如下：
　　 1.不同品種梨果棒曲霉毒素產(chǎn)生菌的分離及鑒定：從腐爛的萊陽梨和陽信鴨梨中分離純化得到10株不同產(chǎn)毒能力的棒曲霉素產(chǎn)生菌，形態(tài)學觀察結果：7株為青霉屬，2株為曲霉屬，1株為鐮刀菌屬。

3、利用真菌核糖體ITS序列分析技術初步確定為：青霉(Penicillium sp.8-9)，產(chǎn)紫青霉(Penicillium purpurogenum strain F43)，青霉(Penicillium sp.4382)，曲霉(Aspergillus sp.CRCF11)，青霉(Penicillum sp.3TMS-2011 voucher BGd100p3-1，繩狀青霉(Penicillium funiculosum isolate

4、NG_p14)，雜色曲霉(Aspergillus versicolor strain A11.2)，波蘭青霉(Penicillium polonicum strain F5)，鐮刀菌(Fusarium sp.NRRL44904)和青霉(Penicillium sp.12-20)。根據(jù)10株棒曲霉素產(chǎn)生菌的ITS區(qū)測序結果構建了系統(tǒng)發(fā)育樹，表明10株棒曲霉素產(chǎn)生菌之間具有不同程度的親緣關系。青霉屬菌為優(yōu)勢菌群。篩選出一株產(chǎn)毒能力較強的P-

5、1菌株。
　　 2.主要產(chǎn)毒素菌的生長及產(chǎn)毒規(guī)律：P-1菌株在不同培養(yǎng)條件下生長及產(chǎn)PAT含量有明顯差別。液體察氏培養(yǎng)基不同條件培養(yǎng)：初始pH值越低產(chǎn)毒素量越大，培養(yǎng)過程中pH呈上升趨勢，毒素產(chǎn)生后迅速分解，25℃條件下PAT產(chǎn)量明顯高于其他處理組，菌膜質量遞增至同一水平。梨汁不同溫度培養(yǎng)：培養(yǎng)基pH呈下降趨勢，菌膜質量呈連續(xù)增長趨勢，35℃培養(yǎng)11天時菌膜質量最大，25℃條件下PAT產(chǎn)量較高。菌株P-1在不同環(huán)境中生長及產(chǎn)毒差