他莫昔芬對放射性腦損傷的神經(jīng)保護作用及其機制研究.pdf

1、第一部分他莫昔芬對X射線誘導的小膠質細胞炎性反應的影響及其機制研究
　　 目的：小膠質細胞作為CNS主要的免疫細胞，在全腦放射線照射后被大量激活并釋放多種致炎細胞因子而加重腦組織的炎性損傷，并導致認知功能障礙。研究表明他莫昔芬具有放射增敏性，同時在腦缺血和脊髓損傷等CNS損傷過程中具有強大的神經(jīng)保護作用，因此本部分研究試圖探討他莫昔芬對X射線誘導的小膠質細胞活化及相關炎癥反應的影響，為他莫昔芬在放射性腦損傷的體內研究提供一定的實

2、驗依據(jù)。
　　 方法：建立小鼠來源的BV2小膠質細胞系，分別給予不同劑量(0, 2, 4, 6, 8,10Gy)的X射線照射后，繼續(xù)置于培養(yǎng)箱內孵育24h，觀察小膠質細胞的形態(tài)變化。收集各實驗組細胞上清液，采用ELISA檢測上清液中炎癥因子IL-1β和TNF-a的表達情況；將BV2分為空白對照組、X線照射組、他莫昔芬干預組，照射組給予10Gy的X射線照射，他莫昔芬干預組在10Gy的X射線照射后立即給予他莫昔芬（1μM）孵育干預4

3、5min，換培養(yǎng)基繼續(xù)孵育至放療后24h。將經(jīng)過上述處理的BV2細胞的培養(yǎng)上清液加入星形膠質細胞培養(yǎng)系統(tǒng)或原代神經(jīng)元培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)24h，采用免疫熒光細胞化學方法觀察膠質纖維酸性蛋白（GFAP）和III beta-tubulin的染色變化，觀察星形膠質細胞和神經(jīng)元細胞形態(tài)和數(shù)目的變化情況。
　　 結果：X射線可以激活BV2小膠質細胞的活性，隨著放射劑量的增加，BV2細胞數(shù)目有增多的趨勢，炎癥因子的表達也相應升高，且其表達程度與X射

4、線具有明顯的劑量依賴性；放療后BV2細胞的上清液可以激活體外培養(yǎng)的星形膠質細胞，表現(xiàn)為胞體肥大，突起增多，GFAP的表達增高；X線照射后BV2細胞的上清液可以減少原代神經(jīng)元的細胞數(shù)目。給予他莫昔芬干預后，可以顯著降低放療誘導的小膠質細胞上清液中TNF-α和 IL-1β表達水平；星形膠質細胞的活化程度明顯減弱，神經(jīng)元數(shù)目減少的程度也顯著低于X線照射組。
　　 結論：他莫昔芬通過降低X線誘導的小膠質細胞激活，進而抑制相關致炎因子的產(chǎn)

5、生，減輕星形膠質細胞活化和神經(jīng)元死亡，提示他莫昔芬的神經(jīng)保護作用可能通過抑制小膠質細胞的炎癥作用而發(fā)揮。
　　 第二部分他莫昔芬對成年大鼠放射性腦損傷的神經(jīng)保護作用
　　 目的：他莫昔芬對腦缺血和脊髓損傷具有強大的神經(jīng)保護作用，本研究的第一部分內容也證實其對X射線誘導活化的體外培養(yǎng)小膠質細胞有較強的抗炎作用。本部分內容擬進一步探討他莫昔芬對成年大鼠放射性腦損傷后可能的神經(jīng)保護作用，為放射性腦損傷的防治提供一定的實驗依據(jù)。

6、
　　 方法：實驗動物分為對照組，全腦放療組和他莫昔芬干預組，選擇15Gy的X射線行大鼠全腦照射后給予靜脈注射依文思藍，1d后斷頭取腦檢測腦組織中依文思藍的含量(每組5只大鼠)；其余各實驗組大鼠造模后3d處死，通過測定腦組織的干濕重比例計算腦水腫的形成情況，采用免疫組織化學技術檢測X線照射后小膠質細胞和星形膠質細胞的活化增殖情況，通過Western blot技術檢測OX-42，GFAP的表達水平變化，利用TUNEL和熒光雙標技術

7、觀察放射性腦損傷后各實驗組神經(jīng)元凋亡情況。
　　 結果：對照組中小膠質細胞和星形膠質細胞多處于靜息狀態(tài)，形態(tài)纖細，胞體較小，OX-42和GFAP表達較弱；X線照射后小膠質細胞和星形膠質細胞明顯活化，OX-42和GFAP的表達水平明顯增高，神經(jīng)元細胞凋亡數(shù)目有所增多，腦組織依文思藍含量和含水量也顯著增高；他莫昔芬干預后小膠質細胞和星形膠質細胞的活化受到抑制，OX-42和GFAP的表達明顯減弱，神經(jīng)元凋亡數(shù)目也有所減少，腦組織中依文