鈣離子拮抗劑尼莫同對(duì)大鼠急性放射性腦損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：顱內(nèi)腫瘤術(shù)后的放射治療是目前國內(nèi)外腫瘤臨床治療普遍使用且行之有效的治療方法。放射治療設(shè)備包括60Co治療機(jī)、直線加速器、立體定向裝置，近距離后裝治療機(jī)。治療腫瘤的作用為世人所公認(rèn)的，而副作用也是有目共睹的。部分放射損傷較輕微，而少部分放射損傷則較重，甚至造成病人重要組織器官和重要功能的不可逆的嚴(yán)重?fù)p傷。目前對(duì)顱內(nèi)腫瘤放射治療后的放射性腦損傷的治療逐漸受到臨床醫(yī)師的重視，但治療方法和治療效果都不盡人意。如果能夠采用某些藥物預(yù)防放射性

2、腦損傷，并能夠使放射性腦損傷減少到最低的程度，這將對(duì)病人的預(yù)后及生存質(zhì)量的提高有著十分重要的作用。本實(shí)驗(yàn)將大鼠制備成急性放射性腦損傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，通過給予鈣離子拮抗劑“尼莫同”干預(yù)，觀察“尼莫同”干預(yù)條件下大鼠放射性腦損傷的變化情況并分析其原因，以探討鈣離子拮抗劑“尼莫同”對(duì)大鼠放射性腦損傷的保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制。 方法：取SD大鼠54只，雌雄不限，體重(200±20)g，用抽簽法隨機(jī)分為3組：A組：18只，正常對(duì)照組，不給予任

3、何射線及藥物干預(yù)措施；B組：18只，60Co照射，不給予任何藥物干預(yù)；C組：18只，60Co照射+尼莫同160 μg/Kg。于照射后1d，3d，7d，A、B、C組各取材6只，觀察腦組織含水量及Ca2+含量，以及大鼠腦組織蘇木素-伊紅(HE)染色及免疫組化染色后光鏡下組織學(xué)改變。照射條件：進(jìn)行照射的B組及C組大鼠給予3.6％水合氯醛(10ml/Kg)經(jīng)腹腔注射麻醉后，俯臥位固定于自制的“工”型木架上，光野上界設(shè)于雙眼后眥連線，下界設(shè)于雙耳

4、后連線，左右露空，然后將大鼠置于60Co治療機(jī)床，源皮距80cm，照射野大小為2×3cm2，60Co治療機(jī)源強(qiáng)為3644Ci，吸收劑量率為87.6cGy/min，單次照射劑量為20Gy，參考深度為2cm。B組不給予藥物干預(yù)；C組大鼠于放療后即刻給予尼莫同160 ug/Kg腹腔注射，隨后在處死前每一天同一時(shí)間點(diǎn)給予尼莫同160μg/Kg腹腔注射。照射后1d，3d，7d，進(jìn)行腦組織含水量及Ca2+的測量：①每組隨機(jī)取大鼠3只，脫臼處死，快速

5、取出腦組織，電子天平稱濕重(W)后，置于處理過的器皿中，105℃恒溫干燥箱，烘烤24小時(shí)至恒重(D)，按Elliotl等的公式計(jì)算：腦組織含水量=[(W-D)/W]×100％；②腦組織Ca2+的測量，取上述烘干腦組織用濃硝酸和高氯酸(5:1)浸泡過夜，次日低溫加熱徹底消化，去離子水定容至5ml，全自動(dòng)生化分析儀測定腦組織中Ca2+的含量。B、C組均按照射后時(shí)間點(diǎn)1d，3d和7d進(jìn)行標(biāo)本提取，每組隨機(jī)取3只，A組除不照射外取材各步驟及方法

6、同B、C組，進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色及免疫組化染色后行病理學(xué)觀察。結(jié)果： 1腦組織病理學(xué)改變：A組1d、3d、7d時(shí)大鼠腦組織均未見異常改變，HE染色腦皮層下毛細(xì)血管無充血擴(kuò)張，無腦水腫改變，大腦各部位結(jié)構(gòu)及層次清楚，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰完整。在照射后1d，B、C組大鼠腦組織大體標(biāo)本可見腦表蒼白、稍顯腫脹，B、C組大鼠HE染色可見腦皮層下毛細(xì)血管輕微充血擴(kuò)張，有腦水腫改變，絕大部分神經(jīng)細(xì)胞仍可保持典型的多極形狀、胞核居中、呈嗜堿

7、性染色；照射后3d，B、C組大鼠腦組織大體標(biāo)本顯示腦表蒼白、腫脹，兩組未見明顯差別，B、C組大鼠HE染色可見腦皮層下毛細(xì)血管充血擴(kuò)張，有腦水腫改變，腦白質(zhì)淡染，大部分神經(jīng)細(xì)胞仍可保持典型的多極形狀、胞核居中、呈嗜堿性染色?；屹|(zhì)無明顯病理學(xué)改變。但總體表現(xiàn)可看出C組大鼠腦水腫略輕于B組。照射后7d，B組大鼠腦組織大體標(biāo)本顯示大鼠腦表蒼白、腫脹較前明顯加重，而C組較3d時(shí)無明顯加重，且輕于7d時(shí)的B組大鼠，此時(shí)B組大鼠HE染色可見腦皮層下毛

8、細(xì)血管明顯充血擴(kuò)張，有明顯腦水腫改變，腦組織呈海綿狀，腦白質(zhì)淡染，小血管周圍尤為明顯，部分神經(jīng)細(xì)胞喪失典型的多極形狀而呈圓形、胞核偏位、呈嗜酸性染色?；屹|(zhì)表現(xiàn)為血管和神經(jīng)元周圍膠質(zhì)細(xì)胞的腫脹；在任何時(shí)間段，A組大鼠Bcl-2與Bax的陽性表達(dá)百分比均較低，三個(gè)時(shí)間段的Bcl-2表達(dá)的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Bax表達(dá)的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。B組在各時(shí)間段中Bcl-2的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)有所升高，顯著高于A組同時(shí)間水平，隨后隨時(shí)間

9、延長逐漸下降，7d時(shí)陽性表達(dá)百分比最低，與1d時(shí)的陽性表達(dá)百分比之間存在顯著性差異；B組在各時(shí)間段中Bax的陽性表達(dá)百分?jǐn)?shù)均有不同程度的升高，顯著高于A組同時(shí)間段水平；3d時(shí)B組大鼠腦組織Bax的陽性表達(dá)百分?jǐn)?shù)最高，7d與3d時(shí)無顯著性差異。C組中各時(shí)間段的Bcl-2的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)也高于A組，7d時(shí)的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)顯著高于3d，且隨時(shí)間的延長Bcl-2陽性表達(dá)逐漸增多；C組各時(shí)間段的Bax的陽性表達(dá)百分比也高于A組，3d、7d的陽性百

10、分?jǐn)?shù)明顯高于1d，但3d、7d兩者之間無明顯差異。 2腦組織含水量的變化：A組大鼠腦組織含水量在1d、3d、7d各時(shí)間段之間沒有顯著性差異(P>0.05)；B、C兩組大鼠腦組織含水量各自分別在3d、7d時(shí)與1d相比均有顯著性差異(P<0.05)，然而在3d與7d相比兩組均無顯著性差異(P>0.05)。照射后1d、3d和7d時(shí)B、C組腦組織含水量均高于A組，均有顯著性差異(P<0.05)，而B、C兩組之間在1d和3d時(shí)均無顯著性差異(P>

11、0.05)；而7d時(shí)B、C兩組有差異(P<0.05)。 3Ca2+含量的變化：A組大鼠腦組織Ca2+含量在1d、3d、7d各時(shí)間段之間沒有顯著性差異(P>0.05)；B組大鼠腦組織Ca2+含量在第3d時(shí)明顯高于1d(P<0.05)，第7d時(shí)明顯高于1d和3d(P<0.05)；C組大鼠腦組織Ca2+含量1d時(shí)與3d時(shí)無明顯差異(P>0.05)，1d時(shí)和7d亦無明顯差異(P>0.05)，但7d的Ca2+含量明顯低于3d，有顯著性差異