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文檔簡(jiǎn)介
1、納米金銀自誕生以來(lái)在社會(huì)和科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域取得了巨大成就。如今,隨著納米科技的產(chǎn)業(yè)化,人們?cè)谌粘I钪薪佑|納米材料的機(jī)會(huì)越來(lái)越多,各種尺寸的納米物質(zhì)已經(jīng)以不同的途徑進(jìn)入我們的生活,當(dāng)我們?cè)跒榧{米材料的光輝前景感到振奮的同時(shí),我們還應(yīng)注意到納米材料可能會(huì)給人類帶來(lái)的負(fù)面影響。因此,為了納米金銀在納米生物技術(shù)中進(jìn)一步應(yīng)用,必須對(duì)納米粒子在微觀水平進(jìn)行定量。然而,在納米技術(shù)領(lǐng)域一個(gè)關(guān)鍵的問(wèn)題就是確定最優(yōu)的定量這些納米粒子的分析方法。
2、為了解決這個(gè)問(wèn)題,本實(shí)驗(yàn)首先制備了納米銀和納米金的特異性抗體,并利用抗原抗體之間的特異性反應(yīng)成功建立了間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法(ic-ELISA)和直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法(dc-ELISA)實(shí)現(xiàn)對(duì)這些納米粒子的定量檢測(cè)。為納米粒子的定量檢測(cè)提供了高靈敏、高特異性和簡(jiǎn)單快速的新方法。本論文的主要內(nèi)容和創(chuàng)新點(diǎn)體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
一、成功制備了納米銀的高特異性抗體。采用重氮化法,將自制的50nm銀粒子經(jīng)過(guò)修飾后與載體蛋白質(zhì)進(jìn)行偶聯(lián)反
3、應(yīng)制備成人工全抗原,制備免疫抗原時(shí)載體蛋白采用牛血清蛋白(BSA)。用免疫抗原免疫動(dòng)物得到終點(diǎn)效價(jià)達(dá)到1:64000的納米銀多克隆抗體。
二、成功制備了納米金的高特異性抗體。采用重氮化法,將自制的16nm金粒子經(jīng)過(guò)修飾后與載體蛋白質(zhì)進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)制備成人工全抗原。用免疫抗原免疫動(dòng)物得到終點(diǎn)效價(jià)達(dá)到1:64000的納米金多克隆抗體。
三、制備了納米金 HRP酶標(biāo)記抗體。采用硫酸銨沉淀法對(duì)酶標(biāo)抗體進(jìn)行了純化,將純化好的酶標(biāo)
4、記納米金抗體進(jìn)行定量分析。計(jì)算結(jié)合物的酶量、IgG量和克分子比值分別為1.386 mg/mL、0.824 mg/mL和6.73。酶結(jié)合率為27.72%。
四、基于納米金抗原和抗體間的特異性反應(yīng),成功建立了間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法對(duì)16nm金粒子定量檢測(cè),并對(duì)可能影響ic-ELISA的相關(guān)因素進(jìn)行了優(yōu)化。在最優(yōu)條件下,該方法的最低檢測(cè)限(LOD)為0.01ng/mL,與相似物的交叉反應(yīng)率均低于10%,樣品的加標(biāo)回收率為97.6-1
5、20.6%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.5-6.1%。本文所建立的 ic-ELISA對(duì)16nm金粒子的檢測(cè)方法具有靈敏度高,特異性好,穩(wěn)定可靠等優(yōu)點(diǎn),同時(shí)為其他納米材料的定量分析提供了可靠方法,為人們進(jìn)一步了解納米材料提供了分析手段。
五、建立了抗原包被直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法檢測(cè)16納米金粒子的定量分析方法,并對(duì)可能影響ic-ELISA的相關(guān)因素進(jìn)行了優(yōu)化。在最優(yōu)條件下,檢測(cè)限低至0.06ng/mL,線性范圍為0.1-500
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