乳酸桿菌表面蛋白的黏附性及對腸上皮細(xì)胞的保護(hù)作用研究.pdf

1、表面蛋白是乳酸桿菌發(fā)揮益生作用的主要成分之一，因其種類和功能的多樣越來越受到人們關(guān)注。研究表明表面蛋白是乳酸桿菌起黏附作用的主要因子，而黏附作用對保護(hù)腸道起決定作用。近幾年對脫離菌體的表面蛋白功能及其保護(hù)腸道細(xì)胞的作用機理研究較少，因此本課題利用純化后的表面蛋白對保護(hù)上皮細(xì)胞的保護(hù)作用進(jìn)行研究。
　　本課題研究了不同培養(yǎng)條件下Lactobacillus paracasei subsp.paracasei M5-L和Lactobac

2、illus casei Q8-L表面蛋白表達(dá)量，經(jīng)鹽析法分離純化，SDS-PAGE法證明兩株菌均在45kDa處有單一條帶，經(jīng)液質(zhì)鑒定M5-L分離出來的蛋白主要為表面抗原，Q8-L分離出來的蛋白主要為延伸因子Tu。
　　用Sulfo-NHS-Biotin(l.0mg/mL)對HT-29細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，與電泳分離的表面蛋白進(jìn)行雜交，鑒定出M5-L和Q8-L的表面蛋白與細(xì)胞膜受體特異性結(jié)合的表面蛋白，具有黏附性。原子力顯微鏡觀察到未去表面

3、蛋白的M5-L和Q8-L的表面平滑均勻，而去掉表面蛋白的M5-L和Q8-L的表面相對粗糙和不均勻；測得M5-L和Q8-L的黏附力為1.41nN和0.48nN，去掉表面蛋白的M5-L和Q8-L黏附力為0.70nN和1.28nN；測得M5-L和Q8-L的相對彈力為18.82和27.94，去掉表面蛋白的M5-L和Q8-L的相對彈力為27.31和9.64。分別用排除、競爭和取代實驗研究表面蛋白抑制致病菌S.sonnei黏附HT-29細(xì)胞的作用，

4、得出M5-L和Q8-L的表面蛋白濃度分別為25μg/mL和400μg/mL時效果最好，抑制率為20％~50%。
　　采用Hoechst33258法對不同處理的HT-29細(xì)胞進(jìn)行染色，采用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡情況。只加入S.sonnei的細(xì)胞凋亡率為100.00%、只加M5-L表面蛋白的細(xì)胞凋亡率為5.00%、只加Q8-L表面蛋白的細(xì)胞凋亡率為10.67%、同時加入S.sonnei和M5-L表面蛋白的細(xì)胞凋亡為37.67%、同時加