人類8型皰疹毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄激活蛋白對(duì)ORF45穩(wěn)定性的影響.pdf

1、人類8型皰疹病毒(Human herpesvirus8，HHV-8)，是Kaposi’s肉瘤的致病因子，在宿主細(xì)胞內(nèi)有潛伏和裂解兩種感染狀態(tài)。HHV-8編碼的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄激活蛋白(Replication and transcription activator，RTA)，可激活許多病毒基因，一些宿主基因，以及自身基因的表達(dá)，控制病毒從潛伏到裂解狀態(tài)的轉(zhuǎn)換。HHV-8編碼的另一種蛋白ORF45可通過與干擾素調(diào)節(jié)因子7相互作用抑制宿主的抗病毒反

2、應(yīng)。ORF45還可參與病毒顆粒的裝配釋放等，在病毒裂解周期中發(fā)揮重要作用。
　　 研究發(fā)現(xiàn)，RTA具有泛素連接酶E3的活性，能夠通過泛素化途徑促使一些蛋白以及自身的降解。據(jù)報(bào)道，ORF45可被SIAH-1泛素化和降解。至于RTA是否也能促使ORF45蛋白的泛素化和降解，還是未知，本文對(duì)RTA是否能夠影響ORF45蛋白的穩(wěn)定性進(jìn)行了探究。
　　 本文以O(shè)RF45和RTA的真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人胚胎腎細(xì)胞293T，結(jié)合Weste

3、rn Blot檢測(cè)RTA對(duì)ORF45蛋白的影響，并將免疫印記結(jié)果進(jìn)行量化處理。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：RTA蛋白的表達(dá)能夠降低細(xì)胞內(nèi)ORF45的蛋白水平，且這一現(xiàn)象具有劑量和時(shí)間依賴效應(yīng)；使用蛋白質(zhì)合成抑制劑環(huán)己酰亞胺處理共轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞后，ORF45蛋白緩慢減少，而RTA蛋白的表達(dá)可使ORF45蛋白的衰減加速；蛋白酶體抑制劑MG132的存在，使得RTA對(duì)ORF45蛋白的下調(diào)作用明顯減弱，表明RTA對(duì)ORF45蛋白的這一作用可能是通過泛素化的途徑