類泛素肽影響人8型皰疹病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄激活蛋白的活性.pdf

1、新發(fā)現(xiàn)的人類8型皰疹病毒(HHV-8)是復(fù)雜的DNA病毒，可導(dǎo)致卡波西肉瘤及多種腫瘤。由ORF50基因編碼的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄激活蛋白(RTA)的表達(dá)為病毒重激活所必需，并足以完成HHV-8從潛伏態(tài)到裂解態(tài)的轉(zhuǎn)換。RTA能夠與ORF57啟動子中的RTA應(yīng)答元件結(jié)合，激活ORF57基因的表達(dá)，這是使病毒由潛伏態(tài)轉(zhuǎn)換為裂解狀態(tài)的關(guān)鍵一步。RTA的活性受多種因素的影響，如受蛋白相互作用的影響或翻譯后修飾的影響。類泛素肽(SUMO)作為新發(fā)現(xiàn)的蛋白修飾

2、物，可調(diào)節(jié)靶蛋白的活性。已有報(bào)道指出SUMO可影響與HHV-8 RTA同源的Epstein-Barr病毒RTA的轉(zhuǎn)錄激活能力，而磷酸化修飾也能調(diào)節(jié)HHV-8RTA的活性，但SUMO是否影響RTA的反式激活能力目前尚未知。 本文利用SUMO基因構(gòu)建成真核表達(dá)質(zhì)粒，并與RTA的表達(dá)質(zhì)粒和ORF57報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)SUMO能抑制RTA對ORF57啟動子的激活功能，且抑制作用呈現(xiàn)出劑量依賴效應(yīng)。與SUMO G97A突變體

3、相比，SUMO的抑制效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于其突變體。將催化SUMO修飾的Ubc9真核表達(dá)質(zhì)粒與RTA表達(dá)質(zhì)粒和ORF57報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)Ubc9同樣具有抑制RTA對ORF57的轉(zhuǎn)錄激活活性的功能，并表現(xiàn)出劑量依賴性。當(dāng)SUMO和Ubc9共表達(dá)時(shí)，兩者可協(xié)同作用，進(jìn)一步加強(qiáng)對RTA活性的抑制。借助蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)技術(shù)發(fā)現(xiàn)RTA的表達(dá)不受SUMO和Ubc9的影響，表明SUMO和Ubc9對RTA反式激活能力的下調(diào)并不是由于RTA蛋白表達(dá)水平的改變