小崗青仁黑豆部分活性物質(zhì)的研究.pdf

1、“健康”“安全”一直是被人們關(guān)注的問(wèn)題。天然植物中的抗氧化活性物質(zhì)，具有一定營(yíng)養(yǎng)及藥用價(jià)值，且因來(lái)源于植物體安全性更高，一直備受人們的青睞。如功能性不飽和脂肪酸、黃酮類(lèi)物質(zhì)和多糖等抗氧化活性物質(zhì)在食品、醫(yī)藥和化妝品行業(yè)中均被廣泛應(yīng)用。
　　黑豆(Glyeine Soja Sieb.et.Zucc)為豆科大豆植物的黑色種子，亦稱(chēng)烏豆。因種仁顏色不同被分為黑皮青仁黑豆和黑皮黃仁黑豆。我國(guó)有豐富的大豆資源,因地理環(huán)境的不同，內(nèi)含的活性物

2、質(zhì)也有差異。安徽省和縣、泗縣、鳳陽(yáng)等地的小崗青仁黑豆以其高蛋白、中脂肪、富營(yíng)養(yǎng)著稱(chēng)。然而，對(duì)其基本營(yíng)養(yǎng)組成與功能性成分分析研究幾乎處于空白，該資源尚未得到有效開(kāi)發(fā)和利用。故此，本文針對(duì)小崗青仁黑豆開(kāi)發(fā)中部分問(wèn)題展開(kāi)研究，為其后期開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。
　　對(duì)小崗青仁黑豆中基本成分進(jìn)行了測(cè)定；并對(duì)部分抗氧化活性物質(zhì)進(jìn)行了測(cè)定和分析：利用GC內(nèi)標(biāo)法測(cè)定小崗青仁黑豆中α-亞麻酸、γ-亞麻酸含量；小崗青仁黑豆中的總黃酮的含量測(cè)定，并比對(duì)了

3、幾種黑豆的抗氧化能力；運(yùn)用響應(yīng)面優(yōu)化了小崗青仁黑豆粗多糖的提取工藝；篩選小崗青仁黑豆皮色素純化適用的大孔樹(shù)脂，并考察影響樹(shù)脂吸附解吸的因素，優(yōu)化純化條件；并采用HPLC對(duì)小崗青仁黑豆的色素進(jìn)行分離；運(yùn)用HPLC-MS手段，對(duì)黑豆皮花色苷進(jìn)行了鑒定。研究結(jié)果表明：
　　1.小崗青仁黑豆基本成分通過(guò)測(cè)定分析得到：
　?。?）小崗青仁黑豆的水分含量為7.0±0.1％，粗脂肪含量18.31±0.1%，蛋白含量37.38±0.11%，

4、灰分含量1.77±0.02%，還原糖含量1.77±0.02%。
　?。?）小崗青仁黑豆中必需氨基酸的含量為：異亮氨酸1.2 mg/100mg，亮氨酸2.19 mg/100mg，賴(lài)氨酸1.87 mg/100mg，蛋氨酸0.37 mg/100mg，苯丙氨酸1.39 mg/100mg，蘇氨酸1.09 mg/100mg，纈氨酸1.18 mg/100mg，組氨酸0.75 mg/100mg。礦質(zhì)元素含量為：鈣：772.1mg/100g，鐵22

5、.98mg/100g,銅6.16mg/100g，鉀8309.42mg/100g，錳22.94mg/100g，鋅24.92mg/100g。
　　2.采用內(nèi)標(biāo)法同時(shí)測(cè)定黑豆中的α-亞麻酸和γ-亞麻酸。以十七烷酸甲酯為內(nèi)標(biāo)物，DB-WAX柱對(duì)α-亞麻酸和γ-亞麻酸的分離效果良好，分離度>2，能完全分離；其峰面積與質(zhì)量濃度均有良好的線性關(guān)系，r>0.9990；樣品加標(biāo)回收率（n=6）為87.5%～95%；RSD%分別為4.8%和0.9%，

6、最低檢出限為0.0002 mg/mL。該方法能同時(shí)測(cè)定黑豆脂肪酸中的α-亞麻酸和γ-亞麻酸。選取國(guó)內(nèi)市場(chǎng)具有代表性的四種黑豆測(cè)定二者的含量，其范圍分別為：α-亞麻酸：8070～33000 mg/kg；γ-亞麻酸：0～770 mg/kg。
　　3.小崗青仁黑豆中總黃酮含量測(cè)定，小崗青仁黑豆中含黃酮量達(dá)到了5.9%。采用DPPH法和FRAP法對(duì)四種黑豆的乙醇提取液進(jìn)行抗氧化性測(cè)定和對(duì)比。DPPH/FRAP相關(guān)系數(shù)為0.8982>0.8

7、，兩者表現(xiàn)出良好的相關(guān)性，說(shuō)明總黃酮對(duì)抗氧化性的貢獻(xiàn)較大。結(jié)果表明：相同產(chǎn)地的遼寧彰武黑美人，黃仁（LH）的抗氧化活性明顯高于青仁（LQ）；而種仁相同的小崗青仁黑豆和遼寧彰武黑美人（LQ）相比，小崗青仁黑豆的抗氧化活性明顯高于遼寧彰武黑美人。
　　4.為探索黑豆粗多糖在超聲波輔助下堿液提取的最佳條件，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面分析法對(duì)黑豆粗多糖提取工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化。超聲波堿液提取的最佳條件：堿液濃度0.35 mol/L，超聲

8、波處理時(shí)間16 min，提取溫度90℃。粗多糖得率為7.48%。
　　5.對(duì)3種非極性吸附樹(shù)脂進(jìn)行篩選，HP-20大孔樹(shù)脂為黑豆皮色素純化最適吸附劑。pH值在2-3之間，上樣流速：1.5mL/min吸附效果最佳；洗脫液為60%乙醇（pH=2.2），洗脫流速：2mL/min時(shí)洗脫效果最好。HP-20樹(shù)脂最大吸附量為12.157mg/g(樹(shù)脂)，色素液純化后色價(jià)為原來(lái)的2.5倍。
　　6.經(jīng)系列柱層析（HP-20，聚酰胺），對(duì)小