E-鈣粘附素-β-連環(huán)素復(fù)合體對孕鼠神經(jīng)干細(xì)胞遷移和歸巢的影響.pdf

1、脊髓損傷(Spinal cordin jury，SCI)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的嚴(yán)重創(chuàng)傷，是造成癱瘓的主要病因。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，SCI是不可修復(fù)和再生的，近年來大量研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)干細(xì)胞(Neural stem cells，NSCs)具有多向分化潛能，在特定的環(huán)境中對神經(jīng)系統(tǒng)缺血、損傷、變性等原因造成的功能障礙有明顯的修復(fù)作用。脊髓損傷后再生能力受限主要是因?yàn)槿狈φT導(dǎo)、促進(jìn)神經(jīng)再生的微環(huán)境，而非損傷的軸突本身不具有再生能力。本實(shí)驗(yàn)就是研究一些細(xì)胞因子

2、，主要是一些粘附分子(adhesion molecules，AM)對NSCs遷移和歸巢的影響。
　　 E-鈣粘附素(E-cadherin)和β-連環(huán)素(β-catenin)，由于它們在其作用的時(shí)候相互依存，所以經(jīng)常把它們放在一起研究。E-cad屬于鈣粘素家族中一員，廣泛存在于各類上皮細(xì)胞中，是一種鈣依賴性粘附分子，主要介導(dǎo)同型細(xì)胞間的粘附反應(yīng)，并起細(xì)胞骨架作用，維持組織結(jié)構(gòu)的完整性和上皮極性。cat是一組具有相似結(jié)構(gòu)的胞內(nèi)糖蛋白

3、家族，分為4大類，即α-cat、β-cat、γ-cat和P120ctn。β-cat通過介導(dǎo)α-cat和E-cad的相互作用參與細(xì)胞間的粘附，處在E-cad/cat復(fù)合體的核心位置，因而可能是E-cad功能的調(diào)節(jié)位點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用實(shí)時(shí)定量PCR測定孕鼠神經(jīng)干細(xì)胞中E-cad和β-cat在神經(jīng)干細(xì)胞原代和傳代4-6代后的含量變化，并結(jié)合流式細(xì)胞技術(shù)測量β-cat相應(yīng)的變化，從而判斷粘附分子對神經(jīng)干細(xì)胞的傳代有何影響。
　　 目的：本課

4、題采用RT-PCR測量神經(jīng)干細(xì)胞在原代和傳代4-6代后E-cad和β-cat的表達(dá)量是否有所變化，同時(shí)在蛋白表達(dá)水平借助流式細(xì)胞技術(shù)測量β-cat相應(yīng)的表達(dá)變化，進(jìn)而判斷這兩種粘附分子在神經(jīng)干細(xì)胞的傳代過程中有何影響，為以后神經(jīng)干細(xì)胞的遷移、植入的研究打下基礎(chǔ)。
　　 方法：孕鼠神經(jīng)干細(xì)胞若干，先進(jìn)行Nestin染色，證明神經(jīng)干細(xì)胞未分化，取一部分進(jìn)行RT-PCR檢測E-cad和β-cat的含量，和流式技術(shù)進(jìn)行β-cat的含量檢

5、測，剩余的繼續(xù)培養(yǎng)，保持傳代不分化，傳代4-6代，即2周左右，再一次重復(fù)前面的操作，統(tǒng)計(jì)前后的結(jié)果有無差別。
　　 結(jié)果：應(yīng)用RT-PCR發(fā)現(xiàn)神經(jīng)干細(xì)胞傳代4-6代后，E-cad和β-cat的含量明顯增多，且差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；相應(yīng)的流式細(xì)胞技術(shù)測量β-cat的含量變化，我們發(fā)現(xiàn)β-cat的含量也明顯增多，且差別同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：粘附分子E-cad和β-cat在神經(jīng)干細(xì)胞的