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文檔簡介
1、阿魏酸酯酶是降解半纖維素之間,半纖維素與木質素之間相連的阿魏酸酯鍵的總稱,它在植物纖維材料的完全降解過程中發(fā)揮著重要的作用,有利于細胞壁物質中多糖的降解和木質素的釋放.該酶廣泛應用于食品、造紙、飼料、醫(yī)藥等領域。本論文從阿魏酸酯酶高產(chǎn)菌的誘變選育開始,研究了阿魏酸酯酶的深層液體發(fā)酵及固體發(fā)酵技術及工藝,探索新型的發(fā)酵方法對產(chǎn)阿魏酸酯酶的影響。論文的主要研究結果如下:
(1)對從實驗室篩選到的菌株進行γ-射線誘變,然后通過以阿魏
2、酸甲酯為主要碳源的平板篩選,再經(jīng)過的液體發(fā)酵實驗以及遺傳穩(wěn)定性實驗,獲得一株產(chǎn)酶較好,遺傳性穩(wěn)定的真菌c11。該菌種在液體深層發(fā)酵條件下,在第6天達到產(chǎn)酶高峰,最高酶活最高可以達到178.46U/L,比酶活可以達到493.41g/L,與原始菌株相比分別提高17.42%和34.68%。通過形態(tài)觀察和28SrRNA序列分析等方法,將該菌株c11鑒定為黑曲霉。將該菌株命名為黑曲霉ZJUQH。
(2)用單因素實驗的方法確定產(chǎn)阿魏酸酯酶
3、的最佳碳源和氮源,然后采用響應面方法對黑曲霉ZJUQH深層發(fā)酵產(chǎn)阿魏酸酯酶的培養(yǎng)基進行優(yōu)化,得到黑曲霉ZJUQH深層發(fā)酵產(chǎn)阿魏酸酯酶的最優(yōu)培養(yǎng)基組成為2.26%豆粕、1.035%蛋白胨、0.3%KH2PO4、0.8%Na2HPO4·7H2O、O.01%NaCl和0.02%MgSO4·7H2O,最后驗證試驗進一步確定黑曲霉ZJUQH產(chǎn)阿魏酸酯酶的比酶活提高了56%。
(3)通過向黑曲霉ZJUQH液體深層發(fā)酵中添加不同濃度的滑石粉
4、、氧化鋁、高嶺土來改善產(chǎn)酶,從實驗結果來看,添加微顆粒確實改善了產(chǎn)阿魏酸酯酶的效果,其中,添加0.5g/L的滑石粉、氧化鋁、高嶺土可以使黑曲霉產(chǎn)阿魏酸酯酶比酶活達到最高。這個研究通過微顆粒提供一種新的可能來優(yōu)化和設計高產(chǎn)量的絲狀真菌形態(tài),這對黑曲霉ZJUQH工業(yè)化大量生產(chǎn)阿魏酸酯酶具有很高的價值。
(4)采用單因素實驗的方法確定黑曲霉ZJUQH固體發(fā)酵產(chǎn)阿魏酸酯酶的最佳碳源,分別為麩皮粉、玉米棒粉、稻草粉,然后利用混料設計,對
5、三種成分的配比進行優(yōu)化,來探索混合碳源的配比,確定碳源最佳的固態(tài)發(fā)酵配方為56%的麩皮粉和44%玉米棒粉。最后采用響應面方法對黑曲霉ZJUQH固體發(fā)酵產(chǎn)阿魏酸酯酶的培養(yǎng)基進行優(yōu)化,確定了黑曲霉ZJUQH深層發(fā)酵產(chǎn)阿魏酸酯酶的最優(yōu)培養(yǎng)基,在250ml錐形瓶中的優(yōu)化培養(yǎng)基為2.8g麩皮、2.2g玉米棒粉、0.6g蛋白胨、12.2ml蒸餾水、0.03gKH2PO4、0.08gNa2HPO4·7H2O、0.001gNaCl和0.002gMgSO
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