基于水淬滅熒光探針納米乳經(jīng)皮轉(zhuǎn)運研究.pdf

1、中文摘要目的皮膚是一個重要的給藥部位，但是，皮膚是人體的外層屏障，角質(zhì)層在防御外來毒素對機體入侵的同時，也限制了大部分藥物的經(jīng)皮遞送。近年來，納米乳在促進藥物經(jīng)皮吸收方面的作用備受關(guān)注。但是由于皮膚結(jié)構(gòu)復(fù)雜，納米乳能否整體進入皮膚，至今還未得到明確的證據(jù)。熒光標(biāo)記為研究納米乳經(jīng)皮轉(zhuǎn)運提供了良好示蹤工具，但是傳統(tǒng)的熒光探針從納米乳中釋放后，仍然具有熒光信號，并不能區(qū)分完整納米乳信號和游離探針信號。本文采用一種新型水淬滅熒光探針（P4）實現(xiàn)

2、納米乳的整體識別，該類探針具有靈敏的水淬滅特性，當(dāng)其包裹在納米乳內(nèi)部可以發(fā)出近紅外熒光，一旦納米乳破裂，探針釋放遇水，則熒光分子經(jīng)由分子間ππ堆積而熒光淬滅。另外，納米乳中包載傳統(tǒng)熒光探針C6模擬載帶的藥物。本文通過納米乳整體識別熒光技術(shù)，考察不同粒徑納米乳在完整皮膚和經(jīng)微針處理皮膚的透皮轉(zhuǎn)運情況，同時研究皮膚中納米乳被抗原遞呈細胞攝取的可能性。方法1.本文采用膜乳化儀和高壓均質(zhì)機分別制備了同時包載P4和C6的不同粒徑納米乳。2.三種不

3、同粒徑納米乳給藥后，不同時間取下給藥部位皮膚，冷凍切片，使用DAPI對細胞核進行標(biāo)記，激光共聚焦顯微鏡觀察納米乳經(jīng)皮轉(zhuǎn)運情況。3.同時，使用CD1a對APCs進行標(biāo)記，激光共聚焦顯微鏡觀察納米乳與APCs信號的分布，探索其被APCs攝取的可能性。4.另外，考察了NE80和NE500在經(jīng)微針處理的皮膚中經(jīng)皮轉(zhuǎn)運情況。結(jié)果1.納米乳的粒徑分別為：80nm(NE80)、200nm(NE200)和500nm(NE500)。透射電鏡觀察，各粒徑納

4、米乳均呈球形，且表面光滑。以熒光強度和粒徑為指標(biāo)，考察了三種粒徑的納米乳在不同介質(zhì)中的穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)介質(zhì)的pH及表面活性劑對納米乳的穩(wěn)定性影響極小。2.粒徑對納米乳的經(jīng)皮轉(zhuǎn)運有較大影響；毛囊途徑是納米乳滲透進入皮膚的主要途徑；小粒徑納米乳可以穿透角質(zhì)層到達活性表皮層，但無法進入真皮層；小粒徑納米乳更容易進入毛囊；皮膚中納米乳可以釋放載帶藥物，經(jīng)擴散進入皮膚深層。3.皮膚中納米乳信號與APCs信號重疊，表明皮膚中納米乳可能被APCs攝??；毛

5、囊中聚集的納米乳可能被毛囊周圍APCs攝取。結(jié)果表明，納米乳具有潛在的經(jīng)皮免疫作用。4.微針處理破壞角質(zhì)層可顯著促進納米乳的經(jīng)皮轉(zhuǎn)運；粒徑仍然對于納米乳在經(jīng)微針理的皮膚透皮轉(zhuǎn)運有一定影響，小粒經(jīng)納米乳具有更好的透皮效果；載帶藥物可從納米乳釋放，擴散進入皮膚深部。結(jié)論1.本文制備了同時載有P4和C6的不同粒徑納米乳，熒光探針能穩(wěn)定地包裹于納米乳中，且納米乳在不同介質(zhì)中穩(wěn)定性良好。2.P4水淬滅溶液不會在皮膚中熒光復(fù)現(xiàn)，ACQ熒光信號可以用