一種固定化脂肪酶的方法及其在生物柴油反應(yīng)中的應(yīng)用.pdf

1、生物柴油是由植物或動物油脂（主要成分為甘油三酯）與醇類發(fā)生酯交換反應(yīng)而生成的脂肪酸酯，是一種可再生的環(huán)保型的生物能源。傳統(tǒng)的方法合成生物柴油能耗大，污染環(huán)境，且生產(chǎn)成本高，因此用脂肪酶催化合成生物柴油的方法獲得廣泛關(guān)注，它的優(yōu)點(diǎn)在于條件溫和，無污染，產(chǎn)物易分離等。脂肪酶是羧基酯水解酶，其天然底物為甘油酯，是一種重要的工業(yè)酶制劑，應(yīng)用廣泛，然而游離酶存在價(jià)格昂貴，反應(yīng)后不易分離，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化連續(xù)反應(yīng)等諸多的弊端，所以本實(shí)驗(yàn)采用固定化技術(shù)

2、減少這些弊端的產(chǎn)生，利用吸附法和包埋法相結(jié)合固定化實(shí)驗(yàn)室自制的Candida sp.99-125脂肪酶，用于生物柴油的催化合成。
　　本文以硅藻土為載體對脂肪酶進(jìn)行吸附，并考察得到吸附的最佳條件為:在30mLpH7.5的磷酸緩沖溶液中，酶與吸附劑硅藻土的質(zhì)量比為1∶3，其中，硅藻土采用添加劑（聚乙二醇6000、硫酸鎂、吐溫80、椰子油、卵磷脂）進(jìn)行活化，吸附溫度為25℃，吸附時(shí)間為3h，得到最優(yōu)的包埋條件為:將1.5％的海藻酸鈉溶

3、液15mL，1％的明膠溶液15mL與之前吸附好的體系混合均勻后用注射器將其滴加入0.4mol/L的氯化鈣溶液中形成凝膠狀小球，干燥后保存。
　　將所得的固定化酶用于催化月桂酸和正辛醇的反應(yīng)，連續(xù)反應(yīng)28批后酶活基本保持穩(wěn)定。將固定化酶在4℃的條件下放置五個(gè)月，酶活降低小，儲存穩(wěn)定性很好。
　　通過掃描電子顯微鏡對固定化酶的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，固定化酶內(nèi)部孔徑多且均勻，網(wǎng)格結(jié)構(gòu)發(fā)達(dá)，通過能譜分析固定化酶內(nèi)部，酶與硅藻土以吸附的形式存