海藻糖對胸骨低溫保存的保護(hù)作用及其機制的初步研究.pdf

1、實驗一、海藻糖對低溫保存不同時間的胸骨組織ALP活性及3H-TdR摻入的影響
　　 目的:探討海藻糖對低溫保存不同時間的胸骨組織ALP活性及3H-TdR摻入的影響，了解海藻糖在低溫下對胸骨細(xì)胞活力的保護(hù)作用。
　　 方法:新鮮配制兩組保存液，其中：Ⅰ組LPD+10％DMSO，Ⅱ組LPD+10％DMSO+0.10mol/L海藻糖。切取SD大鼠胸骨后立即含有放入上述兩種溶液的凍存管低溫保存，隨機抽取新鮮胸骨組織和低溫保存1d

2、、15d、30d、60d、120d后的胸骨組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，上清液進(jìn)行ALP活性檢測；剩余部分加入3H-TdR做標(biāo)記，檢測胸骨組織細(xì)胞3H-TdR摻入率。
　　 結(jié)果:低溫保存不同時間后，Ⅱ組胸骨上清液ALP活性檢測(95.14％～71.85％)，明顯高于Ⅰ組(85.63％～69.66％)；Ⅱ組胸骨組織細(xì)胞3H-TdR摻入率(98.86％～81.02％)，明顯高于Ⅰ組(94.45％～74.46％)，這種趨勢持續(xù)到低溫保存120天

3、。
　　 結(jié)論:海藻糖在胸骨低溫保存中對組織細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用；檢測胸骨培養(yǎng)液上清中ALP活性及胸骨3H-TdR摻入率的方法可以比較客觀地反映了器官保存后組織細(xì)胞的活力。
　　 實驗二、不同海藻糖濃度對胸骨低溫保存活性的影響
　　 目的:探討不同海藻糖濃度對胸骨低溫保存活性的影響。
　　 方法:新鮮配制四組保存液，均含10％DMSO，分別加入不同濃度海藻糖：Ⅰ組0.05mol/L，Ⅱ組0.10mol/L

4、，Ⅲ組0.20mol/L，Ⅳ組0.30mol/L。切取SD大鼠胸骨后立即放入含有上述四種溶液的凍存管低溫保存，隨機抽取新鮮胸骨組織和低溫保存120d后的各組胸骨組織體外培養(yǎng)，上清液進(jìn)行ALP活性檢測；剩余部分加入3H-TdR做標(biāo)記，檢測胸骨組織細(xì)胞3H-TdR摻入率。
　　 結(jié)果:低溫保存120d后胸骨組織培養(yǎng)上清中ALP活性和胸骨組織細(xì)胞3H-TdR摻入率與新鮮對照組比較均有下降(p<0.05)，其中以Ⅰ組下降較為明顯，而Ⅲ組

5、下降較少。
　　 結(jié)論:海藻糖在0.20 mol/L濃度下對骨骼的保護(hù)作用較好。
　　 實驗三、保護(hù)機制研究：海藻糖對低溫保存的胸骨中Bcl-2和Bax基因表達(dá)的影響及相關(guān)研究
　　 目的：探討海藻糖對低溫保存120天的胸骨組織的Bcl-2及Bax基因表達(dá)的影響，進(jìn)一步證實海藻糖對低溫保存胸骨的保護(hù)作用。
　　 方法：新鮮配置保存液4組：Ⅰ組LPD(低鉀右旋糖酐)液；Ⅱ組LPD+10％DMSO(二甲基亞砜

6、)；Ⅲ組LPD+0.20 mol/L海藻糖；Ⅳ組LPD+10％DMSO+0.20mol/L海藻糖；切取SD大鼠胸骨后立即分別放入含上述4種溶液的凍存管中低溫保存，隨機抽取新鮮胸骨組織和低溫保存120d的4組標(biāo)本，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測不同保存液保存120d的胸骨及新鮮胸骨的Bcl-2和Bax基因的mRNA表達(dá)量。
　　 結(jié)果：在凍存組中，Ⅲ組的Bcl-2表達(dá)量與Ⅰ、Ⅱ組比較有增高(p<0.01)；Ⅳ組的