內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1與SHP-2蛋白互作及其在急性肺損傷的作用.pdf

1、急性肺損傷（acute lung injury，ALI）表現(xiàn)為毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞損傷，毛細(xì)血管通透性增加，血細(xì)胞和蛋白質(zhì)液體滲出，肺泡和肺間質(zhì)水腫，嚴(yán)重時(shí)發(fā)展成為急性呼吸窘迫綜合癥（acute respiratory distress syndrome，ARDS）。內(nèi)皮細(xì)胞主要功能蛋白分子血管內(nèi)皮鈣粘蛋白(VE-cadherin)在炎癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到了重要作用，該蛋白介導(dǎo)了內(nèi)皮細(xì)胞通透性的調(diào)節(jié)和中性粒細(xì)胞的跨膜遷移。影響

2、血管內(nèi)皮鈣粘蛋白功能的相關(guān)分子還有內(nèi)皮細(xì)胞上的細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)，該分子通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)來(lái)調(diào)控中性粒細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞上的粘附和跨細(xì)胞遷移。ICAM-1介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞粘附是如何調(diào)控VE-cadherin介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞跨膜遷移的分子機(jī)制還不清楚。
　　在該研究中，我們通過(guò)免疫沉淀技術(shù)研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞中ICAM-1、VE-cadherin和SHP-2間的蛋白互作情況，以及蛋白互作對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，SHP-2敲減對(duì)

3、內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。并探討SHP-2作為ICAM-1下游信號(hào)分子在中性粒細(xì)胞的粘附、跨內(nèi)皮細(xì)胞遷移和維持內(nèi)皮細(xì)胞通透性中的作用，以及ICAM-1分子介導(dǎo)的信號(hào)通路與急性肺損傷間的相互關(guān)系。試驗(yàn)結(jié)果表明，SHP-2介導(dǎo)了中性粒細(xì)胞的遷移。首先ICAM-1與SHP-2形成免疫復(fù)合物，SHP-2敲減使內(nèi)皮細(xì)胞Src的磷酸化水平升高，而ICAM-1信號(hào)通路激活介導(dǎo)的Src活化反而降低。另外，SHP-2敲減使中性粒細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞上的粘附增加，而中

4、性粒細(xì)胞跨內(nèi)皮細(xì)胞遷移卻受到了一定程度地抑制。為了進(jìn)一步研究SHP-2介導(dǎo)中性粒細(xì)胞遷移的分子機(jī)理，我們用免疫沉淀試驗(yàn)來(lái)闡明。實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步顯示，VE-cadherin可以與ICAM-1和SHP-2形成免疫復(fù)合體。ICAM-1交聯(lián)激活使VE-cadherin與ICAM-1分離，而SHP-2敲減也有效地抑制了VE-cadherin與ICAM-1的結(jié)合。從動(dòng)物試驗(yàn)的結(jié)果可以看出，SHP-2敲減促進(jìn)了LPS介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞在小鼠肺臟的募集，但