針刺血清對哮喘大鼠氣道平滑肌細胞p38MAPK表達的調(diào)控.pdf

1、目的：觀察針刺血清對哮喘大鼠氣道平滑肌細胞p38 MAPK表達的影響，進而探討針刺血清抗哮喘的作用機制。
　　方法：將30只SPF級雄性SD大鼠隨機分為空白組、哮喘模型組及哮喘模型針刺組，每組10只。采用卵蛋白霧化吸入法制作大鼠哮喘模型，通過“三穴五針”法對哮喘模型針刺組大鼠進行針刺干預。動物飼養(yǎng)結束后，對空白組和哮喘模型針刺組大鼠進行腹主動脈取血，離心后抽取上清、220nm過濾除菌，56℃滅活備用于氣道平滑肌細胞干預。通過檢測大

2、鼠氣道阻力和肺順應性、肺泡灌洗液中炎性細胞計數(shù)以及肺組織HE染色判定大鼠哮喘模型的建立。采用不過篩酶消化法原代培養(yǎng)氣道平滑肌細胞，通過傳代純化細胞，并通過形態(tài)學觀察及免疫細胞化學法鑒定細胞。用針刺血清體外干預哮喘大鼠的氣道平滑肌細胞，通過MTT比色法檢測針刺血清體外干預的最適濃度。空白組與哮喘模型組的氣道平滑肌細胞分別給予空白血清、針刺血清及阻斷劑（SB203580）干預。通過免疫細胞化學法、Western blot法及RT-PCR法測

3、定氣道平滑肌細胞中p38MAPK的表達。
　　結果：1與空白組相比，哮喘模型組大鼠肺順應性降低，肺彈性阻力增高；與哮喘模型組相比，哮喘模型針刺組大鼠的肺順應性增高，肺彈性阻力降低。2與空白組相比，哮喘模型組的肺泡灌洗液中炎癥細胞明顯增多；與哮喘模型組相比，哮喘模型針刺組大鼠肺泡灌洗液中炎癥細胞減少。3大鼠肺組織HE染色顯示，哮喘模型組大鼠支氣管壁有大量炎性浸潤，管腔內(nèi)黏液與紅細胞增多，且氣道壁增厚、變形；而針刺組大鼠肺組織管腔內(nèi)黏

4、液及紅細胞顯著減少，管壁的炎性細胞浸潤性破壞亦顯著減少。4采用改良后的組織貼塊法可獲得純度較高、數(shù)量較大的氣道平滑肌細胞。5針刺血清體外干預氣道平滑肌細胞的最適濃度為20％。6經(jīng)空白血清干預的哮喘大鼠氣道平滑肌細胞的p-p38MAPK蛋白表達顯著高于空白組細胞及經(jīng)針刺血清、阻斷劑干預的哮喘模型組細胞。7經(jīng)空白血清干預的哮喘大鼠氣道平滑肌細胞的p38MAPK基因表達高于空白組細胞及經(jīng)針刺血清、阻斷劑干預的哮喘模型組細胞。
　　結論：