Apelin-13在大鼠心肌缺血-再灌注損傷中抗氧化應激及其對心臟功能的保護作用.pdf

1、目的：本實驗通過研究Apelin-13對離體大鼠心臟心肌缺血-再灌注（I/R）損傷中氧化應激狀態(tài)及心臟機械功能的影響，探討Apelin-13能否改善I/R損傷中氧化應激狀態(tài)、心臟功能及其可能機制。
　　方法：選取250g-350g的SD雄性大鼠98只做為研究對象，年齡8周齡，購自南華大學動物實驗中心，將研究對象隨機分為7個組（n=14）：①對照組（Control組）用充氧的K-H液灌流60min；② I/R組，Control組停止

2、灌流30min以制造心臟缺血，然后用標準灌流液復流30min；③IR+ Ap組，心臟在停止灌流前用Apelin（濃度100 nmol/L)處理10min，并在隨后的30min再灌注過程中持續(xù)給予；④I/R+AP+CHE組，在(I/R+AP組)基礎上加入 PKC抑制劑chelerythrine(CHE,5 umol/L)；⑤I/R+AP+LY組，在(I/R+AP組)基礎上加入PI3K抑制劑LY-294002(LY,50 umol/L)；⑥

3、I/R+Ap+εV1-2組，在（I/R+AP）基礎上加入特異的PKCε抑制劑εV1-2(εV1-21 umol/L;)；⑦I/R+AP+5HD組，在(I/R+AP)基礎上加入mitoKATPchannel阻斷劑5-hydroxydecanoate(5HD,100 umol/L)。將心臟主動脈與心臟灌流裝置（Langendorff）相連接，進行逆向灌流。采用Global缺血30min再灌注30min的I/R模型，同時記錄冠脈血流量,左室收

4、縮壓(LVSP)，左心室舒張壓(LVDP)，左室舒張末期壓（LVEDP）及心室率（HR）。使用多種方法測量心臟氧化應激狀態(tài)。熒光DCFH負載單個心肌細胞測量ROS含量；western blot檢測分析SERCA和RyR的氧化修飾水平；微孔過濾器法計算SERCA介導的Ca2+攝取，液體閃爍計數法檢測3H-ryanodine結合力；采用SPSS18.0軟件對數據進行統計分析。
　　結果：Apelin-13降低大鼠心肌I/R過程中LDH

5、水平，升高LVSP，LVDP，HR，降低LVEDP。進一步研究發(fā)現Apelin-13改善I/R過程中氧化還原狀態(tài)及降低單細胞內 ROS水平，降低 SERCA酪氨酸硝化水平，升高SERCA與RyR的GSH水平，恢復SERCA介導的肌漿網Ca2+吸收，以及增加RyR同3H-ryanodine的結合力促進Ca2+釋放，從而穩(wěn)定心肌細胞內Ca2+平衡；經PI3K，PKC，PKCε，mitoKATP channel抑制劑預處理后，Apelin-1