MDS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞端粒異常及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)檢測(cè)MDS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞及T細(xì)胞中hTERT選擇性剪接變異體的表達(dá)并分析其與端粒酶活性，端粒長(zhǎng)度及hTERT表達(dá)的相關(guān)性，闡明MDS患者端粒異常的相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法：
　　收集30例健康供者外周血與30例MDS患者外周血，通過(guò)密度梯度離心方法分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞，F(xiàn)icoll法聯(lián)合Human T cell enrichment cocktail分離外周血T細(xì)胞，Real-time PCR方

2、法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞及T細(xì)胞的端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（hTERT）選擇性剪接變異體的表達(dá)。Real-time PCR方法測(cè)量外周血單個(gè)核細(xì)胞及T細(xì)胞的端粒長(zhǎng)度及hTERT的表達(dá)。端粒酶重復(fù)序列擴(kuò)增法（TRAP）-Elisa檢測(cè) MDS患者及健康供者外周血單個(gè)核細(xì)胞及 T細(xì)胞端粒酶活性。用Spearman相關(guān)分析方法分析MDS患者及健康對(duì)照者外周血單個(gè)核細(xì)胞及T細(xì)胞 hTERT選擇性剪接變異體與端粒酶活性，端粒長(zhǎng)度及 hTERT表達(dá)之間的相關(guān)性

3、。
　　結(jié)果：
　　檢測(cè)結(jié)果顯示MDS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞hTERT選擇性剪接變異體α+β+及變異體α+β-的表達(dá)較健康對(duì)照者升高（n=30，p=0.016；n=30，p=0.002）。與健康對(duì)照者相比，MDS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞端粒長(zhǎng)度明顯縮短(n=30，p=0.002)；端粒酶活性及hTERT表達(dá)升高（n=30，p=0.022；n=30，p=0.007）。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MDS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞端粒酶活性只與hTE

4、RT表達(dá)量相關(guān)；MDS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞hTERT選擇性剪接變異體、hTERT表達(dá)、端粒長(zhǎng)度、端粒酶活性與患者臨床病歷資料無(wú)明顯相關(guān)性。MDS患者外周血 T細(xì)胞hTERT選擇性剪接變異體表達(dá)較健康對(duì)照者升高，其中變異體α+β-的表達(dá)較對(duì)照者升高（n=20，p<0.001），變異體α+β+的表達(dá)也較對(duì)照者升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=20，p=0.09）。MDS患者外周血T細(xì)胞端粒酶活性及hTERT表達(dá)較健康對(duì)照者升高（n=20，p=0

5、.002；n=20，p=0.001），端粒長(zhǎng)度較正常對(duì)照組縮短（n=20，p<0.001）。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MDS患者外周血T細(xì)胞端粒酶活性只與 hTERT表達(dá)量相關(guān)；與 hTERT選擇性剪接變異體表達(dá)及端粒長(zhǎng)度無(wú)相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　MDS外周血單個(gè)核細(xì)胞及T細(xì)胞端粒長(zhǎng)度較健康對(duì)照者縮短，端粒酶活性及hTERT表達(dá)升高；MDS外周血單個(gè)核細(xì)胞及T細(xì)胞hTERT選擇性剪接變異體的表達(dá)水平與端粒酶活性及 hTERT表達(dá)