系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人血清中免疫球蛋白N糖的結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、目的：免疫球蛋白表面有豐富的糖基化修飾，這些糖基化修飾不僅僅影響蛋白折疊及構(gòu)象穩(wěn)定，也在免疫識(shí)別信息傳遞方面發(fā)揮著重要作用。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種自身免疫性疾病，患者血清中含有大量的針對(duì)自身成分的抗體，但SLE血清中免疫球蛋白的N-聚糖表達(dá)水平仍不明。本課題著重利用ESI-LTQ質(zhì)譜儀研究SLE血清中免疫球蛋白的N-聚糖結(jié)構(gòu)以及糖基化表達(dá)水平。
　　方法：⑴純化SLE患者血清樣本及正常人血清樣本中的總的免疫球蛋白及IgG；

2、⑵用PNGase F酶酶切處理純化后的樣本，通過C18 SEP預(yù)裝柱去除雜質(zhì)；⑶還原處理N-聚糖的還原末端；⑷在堿性環(huán)境下使用碘甲烷將 N-聚糖進(jìn)行甲基化反應(yīng)，獲得甲基衍生化的 N-聚糖；⑸使用質(zhì)譜儀檢測(cè)并鑒定從血清樣本中純化出的甲基化后的N糖結(jié)構(gòu)；⑹采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)SLE及正常人血清免疫球蛋白表達(dá)的N-聚糖情況進(jìn)行糖組學(xué)分析。
　　結(jié)果：①通過質(zhì)譜儀鑒定分析，我們?cè)赟LE血清總免疫球蛋白中鑒定了43種N-聚糖；對(duì)43種N糖進(jìn)行糖

3、組學(xué)統(tǒng)計(jì)分析后發(fā)現(xiàn)在SLE患者的總免疫球蛋白N糖基化存在半乳糖及唾液酸缺失現(xiàn)象，相對(duì)于正常人其高甘露糖型的N糖修飾表達(dá)量上升，且與SLE臨床診斷指標(biāo)抗ds-DNA抗體含量表達(dá)存在相同趨勢(shì)。②在SLE血清IgG水平上鑒定了27種 N-聚糖，并對(duì)27種N糖鏈進(jìn)行糖組學(xué)分析發(fā)現(xiàn),IgG表面的糖基化也存在半乳糖及唾液酸缺失。
　　結(jié)論：在總免疫球蛋白及單純的IgG抗體水平相對(duì)于正常人都檢測(cè)到 N糖基化發(fā)生異常,主要體現(xiàn)在半乳糖及唾液酸水平