基于手性天冬氨酸的磷酸化肽富集材料的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)磷酸化是影響許多重要的生物化學(xué)反應(yīng)的關(guān)鍵性的生物學(xué)過程，在生物體中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。生物體內(nèi)磷酸化蛋白豐度低、多樣性和分析技術(shù)的局限，使得常規(guī)的質(zhì)譜分析不能夠直接進(jìn)行，因此分離富集磷酸化蛋白/磷酸化肽顯得尤其重要。本課題從優(yōu)化IMAC材料和富集條件出發(fā)，將天冬氨酸Aspartic acid（Asp）兩個(gè)對映異構(gòu)體分開來研究基于不同手性Asp的材料對磷酸化肽選擇性富集的效果。
　　將對映異構(gòu)體L-Asp和D-Asp分別修飾

2、在金芯片表面，螯合金屬離子Fe3+。通過測試修飾前后的金芯片表面的接觸角（CA），發(fā)現(xiàn)接觸角發(fā)生變化，從而確定分子被成功修飾在金芯片表面上。利用石英晶體微量天平（QCM）測試基于不同手性Asp的分子對磷酸化肽的吸附。結(jié)果表明金芯片上修飾的分子對絲氨酸二磷酸化肽(2p-Ser)和三磷酸化肽(3p-Ser)吸附量最大。
　　我們進(jìn)行了一個(gè)探索性的實(shí)驗(yàn)。探索基于不同手性Asp的分子對同一絲氨酸磷酸化肽吸附量大小是否與分子不同手性相對應(yīng)。

3、我們合成acetyl-L(D)-aspartic acid，并用MS、FT-IR和1H-NMR表征確認(rèn)，隨后與Fe3+配位形成acetyl-L(D)-aspartic acid-Fe3+，并將其與絲氨酸二磷酸化肽(2p-Ser)和三磷酸化肽(3p-Ser)作用，利用圓二色譜測試出各產(chǎn)物的CD信號與反應(yīng)物相比確實(shí)發(fā)生了一些變化。我們猜測，這與不同手性分子對2p-Ser和3p-Ser的吸附量差異之間必然存在一定的聯(lián)系。
　　我們將基于

4、Asp的不同手性分子分別修飾到硅球表面，用FT-IR、TG、SEM、XPS和 BET表征確定分子被成功修飾到硅球表面。利用制備的硅球從2μL Casein樣品中分離富集磷酸化肽。結(jié)果，SiO2-L(D)-Asp材料在合適的實(shí)驗(yàn)條件下對樣品中磷酸化肽有較好的富集效果；SiO2-L(D)-Asp-OCH3和SiO2-L(D)-Glu-OCH3材料在同一條件下對Casein樣品進(jìn)行磷酸化肽富集，單磷酸化肽都在10％NH3?H2O餾分中洗脫，選