Fibulin-3在高血壓血管重構(gòu)的表達(dá)及意義研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行論述：
　　第一章 Fibulin-3在自發(fā)性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈中的表達(dá)及與基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制因子的相關(guān)性
　　目的:
　　Fibulin-3作為細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，參與細(xì)胞外基質(zhì)(vascular extracellularmatrix，ECM)的合成與穩(wěn)定，本研究主要探討Fibulin-3及基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinases，MMPs)和金屬蛋白酶組織抑制因子

2、-3(Tissue inhibitors ofmetalloproteinases，TIMP-3)在自發(fā)性高血壓大鼠血管重構(gòu)中的表達(dá)及相關(guān)性。
　　方法:
　　選擇8周齡和16周齡的雄性自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensiverats，SHR)為實(shí)驗(yàn)組;同周齡健康Wistar京都(WKY)大鼠為對(duì)照組;所有大鼠均購(gòu)買于北京維通利華公司，合格證書號(hào):SCXK(滬2003-0003)。經(jīng)腹腔注射3％

3、戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉處死，解剖，取出胸主動(dòng)脈作為研究對(duì)象。胸主動(dòng)脈經(jīng)蘇木素-伊紅(H-E)染色分析血管壁病理改變:包括主動(dòng)脈血管壁厚度（中-內(nèi)膜厚度）和血管壁厚度/管腔比值;運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色和Westernblot蛋白電泳分析胸主動(dòng)脈Fibulin-3、MMP-2、MMP-9、TIMP-3蛋白水平表達(dá);采用Real-time PCR(RT-PCR)檢測(cè)胸主動(dòng)脈Fibulin-3、MMP-2、MMP-9的mRNA水平表達(dá);

4、運(yùn)用Image-Pro Plus6.0軟件對(duì)免疫組化染色切片進(jìn)行灰度定量檢測(cè)。
　　結(jié)論:
　　16周齡的SHR出現(xiàn)高血壓血管重構(gòu)，F(xiàn)ibulin-3、MMP-2和MMP-9在高齡SHR主動(dòng)脈壁中表達(dá)增加，F(xiàn)ibulin-3表達(dá)水平和MMP-2，9水平存在相關(guān)性，可能參與了高血壓血管重構(gòu)的病理過(guò)程。
　　第二章 Fibulin-3對(duì)高血壓大鼠血壓及主動(dòng)脈重構(gòu)的影響
　　目的:
　　探討Fibulin-3和M

5、MP-2，9、TIMP-3在自發(fā)性高血壓大鼠中高血壓血管重構(gòu)的表達(dá)及高血壓血管重構(gòu)血管纖維組織（包括膠原纖維、彈力纖維和網(wǎng)狀纖維）的病理改變和胸主動(dòng)脈氧化應(yīng)激水平的變化;同時(shí)通過(guò)尾靜脈注射外源性Fibulin-3蛋白提高體內(nèi)Fibulin-3水平，研究Fibulin-3對(duì)高血壓大鼠血壓、胸主動(dòng)脈壁纖維組織和氧化應(yīng)激水平及MMP-2，9、TIMP-3的影響。
　　方法:
　　30只8周齡雄性SHR大鼠隨機(jī)分為3組:分別經(jīng)尾靜脈

6、注射外源性Fibulin-3蛋白120mg/kg(低劑量組，F(xiàn)BLN1組，n=10)、240mg/kg(高劑量組，F(xiàn)BLN2組，n=10)和生理鹽水(安慰劑組，n=10)，每周注射1次至16周齡;同周齡雄性的Wistar大鼠10只作為對(duì)照組;所有大鼠均購(gòu)買于北京維通利華公司，合格證書號(hào):SCXK(滬2003-0003)。所有大鼠喂養(yǎng)至16周齡，經(jīng)腹腔注射3％戊巴比妥鈉（50mg/kg）麻醉處死，解剖，取出胸主動(dòng)脈作為研究對(duì)象。胸主動(dòng)脈經(jīng)

7、蘇木素-伊紅(H-E)染色分析血管壁厚度和管壁/腔比值;Masson三色染色法檢測(cè)血管壁膠原纖維的表達(dá);醛品紅法染色檢測(cè)血管壁彈力纖維的表達(dá);氫氧化銀氨液浸染法檢測(cè)網(wǎng)狀纖維的表達(dá);冰凍切片經(jīng)二氫乙啶(Dihydroethidium，DHE)孵育后，綠光激發(fā)顯示血管活性氧族物質(zhì)(Reactive Oxygen Species，ROS)在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況。免疫組織化學(xué)染色和Western blot蛋白電泳分析胸主動(dòng)脈Fibulin-3、MM

8、P-2、MMP-9、TIMP-3蛋白水平表達(dá);RT-PCR檢測(cè)胸主動(dòng)脈Fibulin-3、MMP-2、MMP-9的mRNA水平表達(dá);運(yùn)用Image-Pro Plus6.0軟件對(duì)免疫組化染色切片進(jìn)行灰度定量。
　　結(jié)論:
　　高血壓血管重構(gòu)時(shí)可出現(xiàn)血管壁增厚，血管壁/腔比值增加，膠原纖維成分明顯增多，彈力纖維排列疏松、紊亂，甚至斷裂，血管氧化水平增高;Fibulin-3及MMP-2、MMP-9參與高血壓血管重構(gòu)的發(fā)生過(guò)程;注射

9、外源性Fibulin-3蛋白可以降低高血壓大鼠的血壓水平，改變胸主動(dòng)脈血管重構(gòu)的病理表現(xiàn)，抑制膠原纖維增生，對(duì)彈力纖維損傷起到修復(fù)作用，同時(shí)抑制血管氧化應(yīng)激狀態(tài)，抑制血管壁MMP-2、MMP-9表達(dá)水平。
　　第三章 Fibulin-3與MMP-9/TIMP-3在高血壓病人血清中的表達(dá)及其與脈搏波傳導(dǎo)速度的相關(guān)性
　　目的:
　　探討高血壓病人血清Fibulin-3、MMP-9與TIMP-3水平改變的臨床意義及其與肱-

10、踝脈搏波傳導(dǎo)速度(branchial-ankle Pulse Wave Velocity，baPWV)的相關(guān)性在高血壓血管重構(gòu)的作用。
　　方法:
　　收集我院住院及門診就診高血壓患者50例以及體檢的健康人38例作為對(duì)照人群，所有入選者均于空腹抽取靜脈血4毫升，經(jīng)離心機(jī)3000轉(zhuǎn)/分離心處理后，抽取上清液，放-80℃冰箱貯存。所有血標(biāo)本成批以酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，E