環(huán)渤海灣地區(qū)蘋果輪紋病菌的多樣性研究.pdf

1、渤海灣地區(qū)是我國蘋果主產(chǎn)區(qū)之一，蘋果輪紋病是危害該地區(qū)蘋果枝干和果實的重要病害，發(fā)病率逐年增高，為深入研究該地區(qū)蘋果輪紋病的癥狀及病菌的多樣性，本研究通過對環(huán)渤海灣地區(qū)3個省、23個地市不同年份、不同時期的病害癥狀進行觀察和描述，同時廣泛采集、分離和純化病原菌，共獲得216個供試菌株，研究了菌株的培養(yǎng)學特征、形態(tài)學特征，分析了病菌的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系及致病性分化，主要研究結(jié)果如下:
　　 1.環(huán)渤海灣地區(qū)的蘋果輪紋病癥狀主要表現(xiàn)為6種

2、類型，主要為輪紋隆起型、干腐型、枝枯型、輪紋凹陷型、水泡型和果實輪紋腐爛型。輪紋隆起型和凹陷型是該地區(qū)蘋果枝干輪紋病的主要癥狀類型，果實多為輪紋腐爛型。
　　 2.通過對輪紋病菌菌落的顏色、大小、氣生菌絲的茂密程度、色素、邊緣和背面特征的比較，環(huán)渤海灣地區(qū)的輪紋病菌主要分為五大類型;依據(jù)子實體腔室的結(jié)構(gòu)，顏色，產(chǎn)孢細胞，孢子(分生孢子和子囊孢子)形態(tài)、顏色、大小、結(jié)構(gòu)、隔膜、孢子的大小等形態(tài)學特征，環(huán)渤海灣地區(qū)蘋果輪紋病菌子實體

3、多為黑色或灰白色，表生、半埋生或埋生，單生或聚生，多為球形或扁球形，少數(shù)為圓柱形或不規(guī)側(cè)形狀，子實體可產(chǎn)生三種類型的孢子:分生孢子、子囊孢子和小孢子，部分菌株三種類型孢子混生。形態(tài)學鑒定為Botroshaeria dothidea，其他菌株形態(tài)學特征差異大，尚需明確其分類地位。
　　 3.應(yīng)用DnaSP4.0軟件對176菌株的ITS序列單倍體型分析，供試菌株分為10個單倍體型，Hap_1和Haa_2為環(huán)渤海灣地區(qū)的優(yōu)勢菌株，而其

4、他菌株單倍體型菌株數(shù)量較少。應(yīng)用ITS、β-tubulin和EF-1α等多基因系統(tǒng)發(fā)育單獨和聯(lián)合分析，ITS序列結(jié)果表明，供試菌株主要分為兩個類群，其中Hap_1和Hap_2的單倍體型菌株主要處于第一類群中，共114個菌株，菌株與B.dothidea的同源性很高，為優(yōu)勢類群;另一類群與B.dothidea同源性較低。與參比B.dothidea菌株ITS1、5.8S、ITS2三個保守區(qū)段均有不同程度的變異。β-tubulin序列也顯示出兩

5、個類群，其系統(tǒng)關(guān)系與ITS序列結(jié)果一致。EF-1α序列分析也顯示出兩個類群，差異菌株的系統(tǒng)關(guān)系與ITS序列結(jié)果一致，而與β-tubulin序列結(jié)果部分一致。根據(jù)多基因聯(lián)合系統(tǒng)發(fā)育分析顯示，B.dothidea菌株存在明顯的種內(nèi)差異，從差異較大的菌株類群比較來看，可能存在不同種。
　　 4.將上述培養(yǎng)學、形態(tài)學以及分子系統(tǒng)發(fā)育表現(xiàn)不同類群及差異較大的菌株作為代表菌株，進行室內(nèi)人工接種進行菌株致病性測定。結(jié)果顯示，環(huán)渤海灣地區(qū)蘋果輪