姜黃素衍生物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)肝纖維化的治療作用.pdf

1、目的：探討姜黃素衍生物(Curc-OEG)對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)肝纖維化的治療效果。
　　方法：(1)大鼠肝纖維化模型建立：健康雄性SD大鼠85只，按完全隨機(jī)分組原則進(jìn)行分組，除正常組(A組)10只，其余各組15只，分別為模型組(B組)、低劑量治療組(C組)、中劑量治療組(D組)、高劑量治療組(E組)、秋水仙堿組(F組)。各組分別給予普通飼料和自來水，除A組外，B、C、D、E、F組給予四肢內(nèi)側(cè)皮下注射四氯化碳(CCl4)與橄欖油的混合液(

2、CCl4：橄欖油=2:3)，首次劑量為5mL/kg，以后為2mL/kg，2次/周，一共10周。
　　(2)檢測(cè)姜黃素衍生物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)肝纖維化的治療作用及其機(jī)制：造模第5周起，B組每天給予生理鹽水尾靜脈注射，C、D、E組分別給予25、50、100 mg.kg-1·d-1的姜黃素衍生物尾靜脈注射，F(xiàn)組給予0.1 mg·kg·d-1秋水仙堿灌胃治療。治療過程中繼續(xù)造模以及普通飼料喂養(yǎng)，每次造模前每只大鼠稱量體重，以調(diào)整CCl4及Cu

3、rc-OEG用藥劑量。10周后將所有大鼠處死，心臟采血，測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，取肝組織測(cè)羥脯氨酸(Hyp)含量。肝組織行HE和天狼星紅染色，觀察肝組織病理學(xué)變化以及纖維化程度，并采用Ishak評(píng)分系統(tǒng)對(duì)組織進(jìn)行分期。RT-PCR法檢測(cè)肝組織TIMP-1、MMP-13的mRNA含量的轉(zhuǎn)錄情況。Western bolt法檢測(cè)CollagenⅠ蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：10周后，與模型組比較，低、中、高劑量

4、組及秋水仙堿組ALT、AST含量明顯降低，但是與正常組比較，除高劑量組與正常組差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余各組均有顯著的升高(差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。另外根據(jù)檢測(cè)肝組織Hyp含量結(jié)果相比較，與正常組比較，各組Hyp含量明顯增高(差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)；與模型組比較，低劑量組Hyp含量沒有顯著性差異，中、高劑量組以及秋水仙堿組Hyp明顯降低(差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)；與低劑量組比較，秋水仙堿組Hyp沒有顯著性差異；中、高劑量組Hyp含量明顯低于低劑量

5、組和秋水仙堿組，并且高劑量組明顯低于中劑量組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HE及天狼星紅染色可觀察到正常肝組織結(jié)構(gòu)清晰，未見炎性細(xì)胞及膠原纖維增生，而模型組肝組織結(jié)構(gòu)紊亂，在匯管區(qū)及中央靜脈區(qū)域有粗細(xì)不一的纖維增生，甚至有的已經(jīng)包繞整個(gè)肝小葉而形成纖維結(jié)節(jié)，而經(jīng)過不同劑量的姜黃素衍生物治療后的肝組織可見不同程度的纖維增生，但是可以發(fā)現(xiàn)隨著治療濃度的增高，肝纖維化程度明顯減輕。
　　RT-PCR結(jié)果提示，除了低劑量組的MMP-13mRNA

6、轉(zhuǎn)錄水平與模型組沒有顯著差異外，中、高劑量組與秋水仙堿組均有所上調(diào)(差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)；并且可以觀察到除秋水仙堿組和低劑量組差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而中、高劑量組明顯高于低劑量組及秋水仙堿組，并且高劑量組明顯高于低劑量組(差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。而TIMP-1mRNA轉(zhuǎn)錄水平與MMP-13mRNA在各組間的表達(dá)剛好相反，與模型組比較，低劑量組轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有顯著性差異，但中、高劑量組及秋水仙堿組轉(zhuǎn)錄水平明顯下調(diào)(差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)；與低劑量

7、組比較，秋水仙堿組下調(diào)沒有顯著差異；中、高劑量組下調(diào)較低劑量組和秋水仙堿組更明顯(差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)，且高劑量組下調(diào)比中劑量組下調(diào)更明顯(差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。Western blot結(jié)果顯示模型組CollagenⅠ蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)明顯高于正常組(差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)，經(jīng)低劑量姜黃素衍生物治療后，CollagenⅠ蛋白表達(dá)較模型組沒有明顯差異，而中、高劑量組和秋水仙堿組表達(dá)均有下調(diào)(差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)；但秋水仙堿組下調(diào)與低劑量