Spred-2基因的缺失與四氯化碳誘導的慢性肝損傷和纖維化關(guān)系的研究.pdf

1、背景:肝臟纖維化可以由多種因素導致，在臨床上多見由病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝、自身免疫性疾病。肝臟纖維化是肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生，導致肝內(nèi)彌漫性細胞外基質(zhì)過度沉淀的病理過程。目前認為肝星狀細胞是細胞外基質(zhì)的主要來源。在正常的肝臟中肝星狀細胞位于腔隙中以及主要儲存維他命A.伴隨著慢性損傷，肝星狀細胞被激轉(zhuǎn)化成類成纖維細胞具有促進炎癥發(fā)生和纖維發(fā)生的功能.已激活的肝星狀細胞向組織修復處遷移和增殖，分泌大量細胞外基質(zhì)以及調(diào)節(jié)胞外基質(zhì)的裂解。主要

2、由Kupffer細胞產(chǎn)生的血小板衍生因子是肝星狀細胞的主要刺激因子。MAPK信號通路涉及慢性肝損傷和肝臟纖維化的發(fā)生發(fā)展過程。絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)有一個關(guān)鍵的作用是將細胞外信號轉(zhuǎn)導到細胞核，因此導致了許多細胞的反應，包括增殖，分化，和特定的代謝調(diào)節(jié)途徑。Spred-2基因可以阻礙Ras蛋白依賴的胞外信號調(diào)節(jié)激酶的信號通路，但是其具體調(diào)控機制到目前為止仍舊未能探究清楚。
　　目的:檢測四氯化碳和橄欖油處理的野生型小鼠和Sp

3、red-2基因敲除小鼠的肝臟中，多種細胞因子和趨化因子如TGF-b、IFN-g、CXCL2、CXCL9、CXCL10、以及纖維化的標志物a-SMA、Collagen-1的mRNA水平的表達。再采用免疫印跡的方法測定蛋白質(zhì)水平下的a-SMA表達，以及使用Sircol測定蛋白質(zhì)水平下的Collagen-1的表達。為了探索Spred-2基因在Ras/ERK信號通路下由四氯化碳誘導的慢性肝損傷和纖維化中的調(diào)控作用。
　　方法:在這個慢性肝

4、損傷模型中使用同窩出生的Spred-2基因敲出鼠和野生型鼠。Spred-2基因敲除小鼠和野生型小鼠接受四氯化碳腹腔注射2ml/kg，每周三次處理（四氯化碳∶橄欖油，1∶4，[V∶V]）以及按體重注射總共持續(xù)6周。對照組的Spred-2基因敲除小鼠和C57BL/6J小鼠根據(jù)體重接受橄欖油處理。在最后一次注射48小時后，處死小鼠，收集血液和小鼠肝臟。將小鼠肝臟分為三部分，其中一部分包埋于石蠟中作染色用，一部分迅速冷凍于液氮中作免疫印跡用，第

5、三部分置于RNA later試劑中作實時聚合酶鏈反應用，使用組織學、a-SMA的免疫組織化學法、實時聚合酶鏈反應等方法來展示肝臟病理的發(fā)生發(fā)展過程。
　　結(jié)果:肝臟長期暴露于四氯化碳中，肝臟損傷后炎癥細胞的大量募集導致炎癥反應，表現(xiàn)為肝臟細胞的損傷、壞死、以及肝臟結(jié)構(gòu)的破壞。與野生型小鼠相比，在四氯化碳的誘導下Spred-2基因敲除鼠顯示出明顯更嚴重的肝損傷和纖維化。
　　結(jié)論:(1)在四氯化碳誘導的慢性肝纖維化模型中，含有