姜黃素衍生物抗肝纖維化及抗炎抗氧化作用的研究.pdf

1、目的：探討姜黃素衍生物在四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)大鼠肝纖維化中的抗纖維化及抗炎抗氧化作用。
　　方法：
　　1)四氯化碳肝纖維化造模：6-8周SD雄性大鼠給予CCl4與橄欖油混合液2ml/kg皮下注射，每周2次，總造模時(shí)間10周。造模4周后，將大鼠分為模型組、姜黃素組、姜黃素衍生物組，以正常大鼠作為對照。正常組和模型組給予尾靜脈注射生理鹽水；姜黃素組給予姜黃素400 mg?kg-1?d-1灌胃治療；姜黃素衍生物組給予姜黃素衍

2、生物100 mg?kg-1?d-1尾靜脈注射治療。每組30只大鼠，治療2、4、6周時(shí)，分別心包采血和取肝組織標(biāo)本。
　　2)血清檢測肝功能和肝纖維化指標(biāo)：ALT、AST、HA、LN、PCIII、IV-C；肝組織行HE及天狼星紅染色病理學(xué)檢查；Real-Time PCR檢測肝組織中炎癥相關(guān)因子：NF-kB、IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-1、COX-2和iNOS的mRNA水平；Western Blot檢測肝組織中NF-kB

3、、TNF-α、COX-2的蛋白表達(dá)情況。ELISA法測肝組織中MDA、SOD、GSH水平。
　　結(jié)果：
　　1）姜黃素衍生物對肝功能的影響：治療2周后正常組、模型組、姜黃素組及姜黃素衍生物組ALT/AST分別為：31.7±4.0U/L/160.0±34.4U/L、278.0±17.4U/L/308.0±60.7U/L、174.0±101.6U/L/243.0±105.3U/L、89.0±17.3U/L/156.0±44.2U

4、/L。治療4周后ALT/AST水平分別為：31.7±8.7 U/L/137.7±32.7 U/L、383.0±75.6 U/L/585.3±36.7 U/L、406.3±204.7 U/L/485.0±246.5 U/L、107.0±73.7 U/L/202.7±56.0U/L。治療6周后ALT/AST分別為：29.0±5.6 U/L/135.7±9.6 U/L、549.7±251.2 U/L/669.3±220.6U/L、341.3±

5、56.5 U/L/507.7±165.6U/L、141.7±31.8 U/L/362.7±53.2U/L。姜黃素衍生物較姜黃素有更好的保肝降酶作用，能有效減輕CCl4引起的慢性肝損傷（P<0.05）。
　　2)姜黃素衍生物對肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)的影響：治療6周后，血清中正常組、模型組、姜黃素組及衍生物組HA水平分別為：92.7±19.0μg/L、292.8±105.6μg/L、222.3±38.1μg/L、150.0±26.0μg/

6、L；LN水平分別為：27.7±6.9μg/L、48.8±7μg/L、30.6±5.3μg/L、28.2±4.8μg/L；PCIII水平分別：27.7±2.7μg/L、46.3±6.4μg/L、37.6±6.5μg/L、30.2±3.8μg/L。較模型組，姜黃素組僅LN水平降低（P<0.05）；而衍生物組HA、LN、PCIII水平均降低（P<0.05）。但各組間IV膠原水平未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3)姜黃素衍生物對肝纖維化進(jìn)程的影響：

7、治療4周，HE與天狼猩紅病理切片分析顯示：模型組可見大片的肝脂肪變、炎癥細(xì)胞浸潤，膠原纖維向中央靜脈和匯管區(qū)衍生，偶見假小葉形成；姜黃素衍生物治療后，肝脂肪變、炎癥細(xì)胞侵潤減輕，僅見少量膠原纖維沉積。治療6周，模型組仍可見脂肪變和炎性細(xì)胞浸潤，肝臟結(jié)構(gòu)紊亂，多見假小葉，較4周時(shí)膠原纖維增多、增粗；姜黃素衍生物治療后明顯減少膠原纖維的沉積。肝纖維化程度按Ishak評分，模型組主要分布于F5-F6級；姜黃素灌胃組分布于F3-F5級；姜黃素衍

8、生物組分布于F1-F4級。姜黃素衍生物較姜黃素能更有效地延緩肝纖維化的進(jìn)程。
　　4)姜黃素衍生物對炎癥相關(guān)因子mRNA表達(dá)的影響：在整個(gè)治療過程中，姜黃素衍生物組較模型組IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2和iNOS mRNA的表達(dá)下調(diào)（P<0.05），NF-kB mRNA下調(diào)不明顯。尤其發(fā)現(xiàn)CCl4誘導(dǎo)的纖維化模型中， COX-2mRNA的表達(dá)顯著升高，治療2、4、6周模型組較正常組COX-2mRNA分別上調(diào)7倍、25

9、9倍、35倍；衍生物組較模型組COX-2mRNA分別下調(diào)2倍、23倍、2倍。姜黃素衍生物能夠顯著下調(diào)COX-2mRNA的表達(dá)。
　　5)姜黃素衍生物對NF-kB、TNF-α、COX2蛋白表達(dá)的影響：治療過程中，對比模型組：姜黃素衍生物可以明顯下調(diào)NF-kB、TNF-α的蛋白表達(dá)（P<0.05）。經(jīng)過Western blot分析發(fā)現(xiàn)肝臟中COX-2蛋白表達(dá)低，難以統(tǒng)計(jì)分析。
　　6)姜黃素衍生物對肝臟MDA、SOD及GSH水平