MIF蛋白表達水平及MIF基因多態(tài)性同結(jié)核病關(guān)系的研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　巨噬細胞移動抑制因子(Macrophage Migration Inhibitory Factor，MIF)作為一種促炎性細胞因子，在免疫性疾病的發(fā)病機制中起著重要的作用。體外研究表明，MIF可以抑制致病性結(jié)核分枝桿菌的生長繁殖。結(jié)核分枝桿菌主要感染體內(nèi)的巨噬細胞，MIF能夠抑制巨噬細胞游走，促進感染部位巨噬細胞的聚集、浸潤、增生、活化及分泌一些細胞因子從而參與免疫反應(yīng)。因而，MIF在結(jié)核病的發(fā)生發(fā)展中起了不

2、容忽視的作用。本課題通過檢測結(jié)核病人和對照組人群外周血清中MIF蛋白的表達水平，并對MIF基因啟動子多態(tài)性位點-173G/C和微衛(wèi)星多態(tài)性位點-794CATT5-8進行分析，從而討論MIF與結(jié)核病易感性的關(guān)系。
　　研究方法：
　　(1)收集結(jié)核患者及正常對照組人群外周血，凝固后分離血清；提取所有結(jié)核病人和正常對照人群外周血基因組DNA。
　　(2)通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測血清中MIF的表達水平，并對其

3、表的水平的差異進行分析。
　　(3)用聚合酶鏈反應(yīng)。限制性片段長度多態(tài)性(RELP-PCR)的方法檢測MIF基因啟動子-173G/C位點多態(tài)性，統(tǒng)計其基因型和等位基因的分布頻率，分析其基因多態(tài)性與西南地區(qū)結(jié)核病易感性的關(guān)系。
　　(4)通過基因測序技術(shù)分析結(jié)核病人及健康人群的MIF基因-794CATT5-8微衛(wèi)星多態(tài)性進行檢測，統(tǒng)計其基因型和等位基因的分布頻率，分析其基因多態(tài)性與西南地區(qū)結(jié)核病易感性的關(guān)系。
　　結(jié)果：

4、
　　(1)結(jié)核病人組血清MIF表達水平為(705.21±67.98)pg/ml，顯著高于對照組(355.31+57.29)pg/ml(P<0.01)，表達水平平均升高1倍左右。
　　(2)結(jié)核病人組MIF-173G/C多態(tài)性位點G/G純合子、G/C雜合子、C/C純合子基因型頻率分別是50.7％、34.4％和14.9％；G、C等位基因頻率分別是67.9％和32.1％。健康對照組G/G純合子、G/C雜合子、C/C純合子基因型頻

5、率分別是68.8％、24.9％和6.5％；G、C等位基因頻率分別是81.O％和19.0％。兩組基因型及等位基因頻率的分布差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　(3)結(jié)核病人組MIF基因啟動子微衛(wèi)星多態(tài)性位點-794區(qū)CATT重復(fù)序列拷貝數(shù)所占比例分別是5/5(7.9％)，5/6(13.5％)，5/7(10.7％)，5/8(1.4％)，6/6(21.9％)，6/7(24.7％)，6/8(0.5％)，7/7(10.7％)，7/8(

6、8.8％)；健康對照組分別是5/5(12.7％)，5/6(18.8％)，5/7(13.1％)，5/8(0.8％)，6/6(23.3％)，6/7(24.9％)，7/7(3.7％)，7/8(2.8％)。結(jié)核病人組MIF-794等位基因CATT5、CATT6、CATT7和CATT8所占比例分別是20.7％、41.2％、32.8％和5.3％；對照組則分別是29.0％、45.1％、24.1％和1.8％。基因型CATT7/7和CATT7/8，等位基

7、因CATT7和CATT8的分布具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　(1)結(jié)核病人外周血清中MIF表達水平較健康對照組升高，提示MIF參與結(jié)核病的發(fā)生發(fā)展過程。
　　(2)在西南地區(qū)人群中MIF基因啟動子單核苷酸多態(tài)性位點-173與結(jié)核病易感性相關(guān)。等位基因C可能是增加結(jié)核病易感性的因素之一。
　　(3)在西南地區(qū)人群中MIF基因啟動子微衛(wèi)星多態(tài)性位點-794與結(jié)核病易感性相關(guān)。等位基因CATT7和C