斑點(diǎn)叉尾鮰巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)基因序列克隆及多態(tài)性分析.pdf

1、分類號(hào)：密級(jí)：學(xué)校代碼：學(xué)號(hào)：遣掌師耗大學(xué)碩士學(xué)位論文斑點(diǎn)叉尾觸巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(F)基因序列克隆及多態(tài)性分析作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：杜小溪海洋動(dòng)物分子生物學(xué)赫崇波研究員2014年5月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要斑點(diǎn)叉尾鲴是一種重要的鯰形目、鲴科魚類，自1984年湖北省水科所從美國引進(jìn)以來，現(xiàn)作為重要的養(yǎng)殖對(duì)象在全國20多個(gè)省市、自治區(qū)進(jìn)行養(yǎng)殖。但是由于養(yǎng)殖技術(shù)以及病原生物感染等原因，使得斑點(diǎn)叉尾鲴養(yǎng)殖業(yè)出現(xiàn)了產(chǎn)量

2、下降的問題，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)斑點(diǎn)叉尾鲴免疫基因的研究能夠有效控制病害的發(fā)生。經(jīng)過多年的研究證實(shí)，巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)是一種重要的免疫因子，對(duì)急性和慢性炎癥、自身免疫性疾病、細(xì)胞的增殖和腫瘤血管的形成過程具有重要的調(diào)節(jié)作用。根據(jù)斑點(diǎn)叉尾鲴MIF基因的EST序列，應(yīng)用RACE技術(shù)克隆得到了MIF基因3’UTR序列，運(yùn)用基因步移(GenomeWalking)技術(shù)克隆得到了MIF基因啟動(dòng)子序列，通過特異性PCR克隆得到MIF內(nèi)

3、含子序列。將這些序列進(jìn)行拼接得到了MIF基因組序列。經(jīng)分析斑點(diǎn)叉尾鲴MIF基因組序列長度為3918bp，其中編碼區(qū)序列348bp，共編碼l15個(gè)氨基酸，5UTR是70bp，3UTR是434bp，包含長度分別為243bp和1441bp的兩個(gè)內(nèi)含子，還有1382bp的啟動(dòng)子序列。實(shí)驗(yàn)通過對(duì)斑點(diǎn)叉尾鲴基因組序列的分析，發(fā)現(xiàn)了4個(gè)重復(fù)的單元序列。并對(duì)30尾斑點(diǎn)叉尾鲴個(gè)體MIF基因組序列進(jìn)行了多態(tài)性的分析。結(jié)果顯示，斑點(diǎn)叉尾鲴MIF基因序列包含有

4、60個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SNP)，其中有29個(gè)位于啟動(dòng)子區(qū)域，1個(gè)位于5’UTR，7個(gè)位于3’UTR，1個(gè)位于外顯子，22個(gè)位于內(nèi)含子區(qū)域。其中在啟動(dòng)子上的SNP中，共有6個(gè)位于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)上。實(shí)驗(yàn)利用熒光定量PCR技術(shù)研究了MIF基因在斑點(diǎn)叉尾鲴六個(gè)組織中的分布情況，結(jié)果表明，腸中MIF的表達(dá)量最高，而肌肉中的表達(dá)量最低，其在頭腎、肝和腦的表達(dá)量顯著低于鰓、脾。本研究為斑點(diǎn)叉尾鲴MIF基因組序列研究提供更多的分子生物學(xué)資料，并為