牛分枝桿菌新型融合抗原的制備及在牛結(jié)核抗體檢測中的應(yīng)用.pdf

1、分類 號 密 級華 中農(nóng) 業(yè) 大 學(xué)碩 士 學(xué)位 論 文牛分枝桿菌新型融合抗 原 的制備及在牛結(jié)核抗體檢測 中的應(yīng)用P r eP a ra tio no fN ewF u sio nP r o teina n dA P P lie a tio ninA n tib o d yD e te ctio nfo rD ia g n o siso fB o v in eT u b e r c u lo sis研 究 生 : 劉 冬光指 導(dǎo) 教

2、師 : 郭愛珍 教授指 導(dǎo) 小 組 : 陳煥春 教授楊利 國 教授熊家軍 副教授金梅林 教授周 銳 教授專 業(yè) : 特種經(jīng)濟動物飼養(yǎng)獲得學(xué)位 名稱 : 農(nóng) 學(xué)碩 士研 究方 向: 特種經(jīng)濟動物疾病控制獲得學(xué)位 時 間 : 2010 年 6 月華 中農(nóng)業(yè)大 學(xué)動物科技學(xué) 院二 O 一 O 年 六 月牛分枝桿 菌新 型融 合抗 原 的制 備及 在 牛結(jié)核抗 體檢測 中的應(yīng) 用目 錄摘 要 . . . . . . . . . . . . .

3、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

4、. . . . . ……IA b stra Ct…， ....................................................................................................................… … IV縮 略 語 表 (A bb reviations ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

5、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……V ll1 前 言 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

6、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …11.1 牛 結(jié)核 病 流 行 現(xiàn) 狀 及 國 內(nèi)外 防控 進 展 . . . . . . . .

7、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… 11. 2 牛 結(jié)核 病 病 原 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……21. 3 流 行 病 學(xué) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . .

9、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……21. 4 臨床癥狀 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… 、 . . . . . . . .

10、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……41. 5 牛 結(jié)核病 的抗 體診 斷技 術(shù)研 究進 展 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

11、. . . . . ……51. 5. 1 牛 結(jié)核病 診 斷抗 原 的研 究 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……51. 5. 2 牛 結(jié)核病診 斷方法研 究現(xiàn) 狀 . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

12、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……71. 6 研 究 目的 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

13、. . . . . . . … …， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……102 材 料 與 方 法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

14、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… 122. 1 實驗材 料準備 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

15、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……122.1.1 菌 種 、血 清 及 抗 原 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

16、…… 122. 1. 2 主要試劑 及材料 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . ……122.1. 3 質(zhì) 粒 抽 提 溶 液 的配 制 . . . . . . . . . . . . . . . .

17、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… ， . . . . . . . . . . . . . . ……132.1. 4 十 二烷 基 磺 酸 鈉 一 聚 丙烯 酞 胺 凝 膠 電泳 (SD S一 PA G E ) 相 關(guān) 溶 液 配制 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

18、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… 142.1. S W 己 Stemblot 分 析 緩 沖 液 的配 制 . . . . . . . . . .

19、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……巧2.1. 6E L ISA 緩 沖 液 配 制 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . .

20、. . . . …… 巧2.1. 7 蛋 白表 達 純 化 、多抗 純 化 相 關(guān)試 劑 配 制 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… 巧2. 2 引物 設(shè) 計 及 引物 合 成 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

21、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……162.3 牛 分 枝 桿 菌 抗 原 Rv 3872 、 C F P 10 和 E SAT 6 融合 基 因 的克 隆 、 載 體 構(gòu) 建 及 重組 質(zhì) 粒 鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

22、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… 172 . 3 .1 目的基 因 的 P C R 擴 增 . . . . . . . . . . . . . . . .