Iodogen125I標(biāo)記CD28單克隆抗體2F5的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究125Ⅰ標(biāo)記CD28單克隆抗體2F5的方法及標(biāo)記物125Ⅰ-2F5的生物學(xué)活性及體外穩(wěn)定性，探討125Ⅰ-2F5對(duì)特定腫瘤放射性免疫顯像的可行性。
　　 方法：1.采用Iodogen法125Ⅰ標(biāo)記單抗2F5，測(cè)定t25Ⅰ-2F5的標(biāo)記率；紙層析法測(cè)定125Ⅰ-2F5的放射化學(xué)純度；將125Ⅰ-2F5與不同細(xì)胞數(shù)的小鼠淋巴瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)人CD28基因細(xì)胞株CD28-T細(xì)胞懸液置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中反應(yīng)，測(cè)定標(biāo)記物的免疫活性；將

2、標(biāo)記物按1:20的比例分別加入到生理鹽水和新鮮人血清中，另取標(biāo)記物不稀釋作為對(duì)照，分別置于37℃、4℃條件下，觀察放置0h、2h、4h、24h、48h后標(biāo)記物的放化純度，以了解其穩(wěn)定性。2.自正常裸鼠尾靜脈注射1.11-1.67 MBq/100μL(30-45μCi/100μL)125Ⅰ-2F5后，不同時(shí)間點(diǎn)斷頸處死小鼠，同時(shí)取血液及各主要組織器官標(biāo)本，計(jì)算各組織器官不同時(shí)間點(diǎn)的每克組織百分注射劑量率(％ID/g)；同樣方法，計(jì)算荷淋巴

3、瘤裸鼠模型血液、腫瘤及各組織器官16h、24h、48h的每克組織百分注射劑量率(％ID/g)和腫瘤/非腫瘤(T/NT)比值。3.選用4～6周齡雌性BALB/C裸鼠，建立荷淋巴瘤和非小細(xì)胞肺癌裸鼠模型，尾靜脈注射11.1-14.8MBq/200μL(300-400μCi/200μL)125Ⅰ-2F5并用SPECT進(jìn)行放射免疫顯像，顯像前3d開始用1％碘化鉀溶液200μ L/d灌胃封閉甲狀腺，采用ROI(Region of interest

4、)技術(shù)在不同時(shí)相的顯像圖上勾畫腫瘤輪廓，并計(jì)算瘤體與對(duì)側(cè)相同部位的T/B比值。
　　 結(jié)果：1.125Ⅰ-2F5標(biāo)記率為(68.12±6.19)％，純化后紙層析法測(cè)得即刻125Ⅰ-2F5的放射化學(xué)純度為(97.67±0.59)％，比活度為756.13 MBq/mg；125Ⅰ-2F5與CD28-T細(xì)胞的結(jié)合率隨細(xì)胞數(shù)的增加而增加，當(dāng)細(xì)胞數(shù)為1×107個(gè)時(shí)結(jié)合率達(dá)到最高水平，此時(shí)總細(xì)胞結(jié)合率為(37.31±0.85)％，特異性細(xì)胞結(jié)

5、合率為(34.44±0.93)％；標(biāo)記物加入到不同稀釋液中后，在4℃條件下，對(duì)照組24h后、生理鹽水組4h后放化純?nèi)源笥?0％；在37℃條件下，對(duì)照組24h后、生理鹽水組4h后放化純?nèi)源笥?0％；人血清組48h后的放化純?yōu)?74.59±2.69)％；2.125Ⅰ-2F5在正常裸鼠和荷淋巴瘤裸鼠體內(nèi)主要通過腎臟和肝臟代謝；注射125Ⅰ-2F5后，腫瘤組織的放射性分布及腫瘤組織與各組織器官的T/NT比值隨時(shí)間延長逐漸上升，至24h達(dá)到最大值

6、；3.注射125Ⅰ-2F5后，荷淋巴瘤裸鼠放射免疫顯像腫瘤清晰可見；荷非小細(xì)胞肺癌裸鼠模型的瘤體組織未見明顯放射性濃聚。
　　 結(jié)論：1.Iodogen法125Ⅰ標(biāo)記單抗2F5的標(biāo)記率和放化純高，方法簡便，標(biāo)記物的穩(wěn)定性好且保持較好的免疫活性。2.SPECT進(jìn)行放射免疫顯像，可獲得優(yōu)質(zhì)的淋巴瘤放射免疫圖像。3.本研究為不同放射性碘(123Ⅰ、125Ⅰ、131Ⅰ)標(biāo)記單抗2F5以及建立淋巴瘤的放射免疫顯像和靶向治療方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)