不同品系雞Tmem9A-9B基因的克隆與表達分析.pdf

1、TMEM9(Transmembrane protein9domain family)作為一個跨膜蛋白家族，在從線蟲到人類等不同物種間高度保守。目前，該家族已發(fā)現(xiàn)TMEM9A和TMEM9B兩個成員。人TMEM9A蛋白定位于溶酶體和次級內(nèi)體上，TMEM9B是一種重要糖蛋白，定位于溶酶體膜和初級內(nèi)體膜上。目前，關(guān)于這兩個基因的表達和功能特性研究報道較少。本研究以雞為實驗動物，克隆Tmem9A和Tmem9B基因并對其表達與功能特性進行初探，主要

2、研究方法和實驗結(jié)果如下:
　　首先，本研究克隆了海蘭褐雞、AA+肉雞和三黃雞Tmem9A基因與AA+肉雞和三黃雞Tmem9B基因的全長編碼序列并進行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明:海蘭褐雞、AA+肉雞和三黃雞Tmem9A基因編碼序列全長均為576bp，Tmem9B基因全長均為570bp，不同品系雞的這兩個基因編碼序列均存在SNP位點，但Tmem9A和Tmem9B基因均高度保守。通過對Tmem9A和Tmem9B的核苷酸序列和氨基酸序列比較

3、分析，二者同源性分別為60％與50％左右，表明Tmem9A和Tmem9B之間的同源性不高。蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測分析發(fā)現(xiàn)TMEM9A的50～190AA和TMEM9B的45～188AA位置均存在Tmemb_9超家族結(jié)構(gòu)域;TMEM9B的N-端4～23AA存在一個跨膜結(jié)構(gòu)域，而TMEM9A無此跨膜區(qū);TMEM9A和TMEM9B蛋白均存在N端信號肽、cys富集區(qū)和N-糖基化位點;3D結(jié)構(gòu)預(yù)測表明TMEM9A和TMEM9B蛋白均存在螺旋區(qū)。
　　其

4、次，對Tmem9A和Tmem9B基因進行了組織表達譜分析，結(jié)果顯示Tmem9A和Tmem9B基因在14日齡AA+雞、三黃雞和海蘭褐雞雛雞的多種組織中均有表達，但是不同品系雛雞間略有差異。有趣的是，Tmem9A和Tmem9B基因在三個品系雛雞的腦組織中均具有高轉(zhuǎn)錄活性。在不同發(fā)育階段海蘭褐雞的組織表達譜分析顯示，Tmem9A和Tmem9B表達活性均在24月齡成雞腺胃中顯著上調(diào)。
　　最后，對炎癥模型和疫苗免疫模型雛雞Tmem9A和T

5、mem9B基因進行組織表達譜分析，結(jié)果顯示在LPS制備的炎癥模型雛雞中，Tmem9A基因的表達活性在海蘭褐雞法氏囊中上調(diào)而在肝臟、脾和胸腺中下調(diào);在AA+肉雞的胸腺中下調(diào)，在肝臟、脾和法氏囊中上調(diào)。Tmem9B基因在兩個品系雞4種組織（肝臟、脾、法氏囊和胸腺）中的轉(zhuǎn)錄活性均上調(diào)。在疫苗免疫的海蘭褐雞中，Tmem9A基因的表達活性在新城疫疫苗免疫模型4個免疫相關(guān)組織（肝臟、脾、法氏囊和胸腺）中均上調(diào);在禽流感疫苗免疫模型的肝臟和脾中上調(diào)，